1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
国内外研究概况：目前国内外生防微生物的作用机理已经逐渐揭示，但多个方向尚未深入解析，制约了生防产业的发展及其下游有机、绿色农产品的开发。
近些年，小分子RNA在重要作物病害防治及调控机制研究方面取得了一些重要进展，如：miR319/miR159和miR172在番茄曲叶病毒侵染时被显著诱导表达（Navi et al.,2010）。
小麦接种白粉病后，通过高通量测序发现有24种miRNAs在白粉病菌侵染后被抑制或者诱导表达(Xin et al.,2010)。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标本实验旨在分别获得sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的过表达转基因植株，为后期解析sly-miR482在调控蜡质芽胞杆菌AR156诱导植物系统抗性过程中的作用机制提供转基因材料。
二、研究内容使用Gateway克隆技术对sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e分别进行克隆，及使用农杆菌介导的叶盘转化法获得其过表达转基因植株。
三、拟解决的关键问题分别获得对sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的克隆。
3. 研究的方法与方案
一、研究方法对前期验证的sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e基因进行克隆，构建基因过表达载体。
二、技术路线通过Gateway克隆技术对sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e基因进行克隆，后利用农杆菌介导的叶盘转化法，在番茄植株内进行过量表达，获得过表达转基因植株。
三、实验方案（一）目的基因材料准备1.分别设计sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的前后引物，并利用引物，通过PCR技术，分别获得sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的大量片段。
4. 研究创新点
该项目将以番茄小RNA miR482为研究对象，探索其在生防菌AR156诱导番茄系统抗病性过程中的作用，借此揭示植物小RNA在生防菌诱导植物抗病性过程中的作用。
5. 研究计划与进展
（一）目的基因材料准备2016年12月分别获得sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的农杆菌EHA105过表达载体。
（二）转基因植株构建2017年3月分别获得sly-miR482a、sly-miR482b、sly-miR482c、sly-miR482d、sly-miR482e的过表达转基因番茄植株。
并完成毕业论文的撰写。
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