1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:P450是昆虫重要的解毒酶,抗性昆虫的P450上调表达将会导致害虫对杀虫剂的抗药性增强。
昆虫被杀虫剂处理后也会导致某些P450基因表达上升。
目前普遍认为P450的诱导表达上调或组成型表达增加与该基因上游的顺式作用元件有关。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标和内容:1、利用基因组步行技术克隆得到甜菜夜蛾CYP3218、CYP321A16、CYP6AE10和CYP9A8上游2000bp以上的基因序列;2、比较甜菜夜蛾抗性种群与敏感种群之间上述序列的差异;3、分析上述序列中的转录因子结合位点。
拟解决的关键问题:通过克隆得到甜菜夜蛾P450基因5端上游序列
3. 研究的方法与方案
研究方法:利用基因组walking方法获得P450基因5端上游序列,利用分析软件进行启动子和转录因子位点预测,通过pcr方法分析抗性品系和敏感品系P450基因5端上游序列的差异。
实验方案:1.基因组walking方法获得P450基因5端上游序列→2.分析软件进行启动子和转录因子位点预测→3.pcr方法分析抗性品系和敏感品系P450基因5端上游序列的差异可行性分析:本课题研究方法科学合理,技术路线符合逻辑;实验条件充足完备:科研进行所需要的仪器、试剂以及实验场所;而且杀虫剂毒理与抗性实验室有多年的分子生物学研究基础,实验室人员具备高超的分子生物学实验理论知识与操作技能。
所以该研究课题切实可行。
4. 研究创新点
甜菜夜蛾P450基因表达上调的机制仍是未解之谜,该研究首次对甜菜夜蛾P450基因5端上游序列进行克隆分析,有助于揭示甜菜夜蛾对菊酯、氯虫苯甲酰胺、阿维菌素等药剂产生抗性的突变机制。
5. 研究计划与进展
1、 在2016年12月下旬克隆得到甜菜夜蛾P450上游序列;2、 在2017年1月通过软件分析找到转录因子的结合位点。
通过pcr分析甜菜夜蛾抗性种群与敏感种群之间P450基因5端上游序列差异
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