1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
卵菌与真菌在形态上相似,但在进化上和藻类更加相近【1】,其生物学特征主要表现为细胞壁大多由纤维素构成、营养生长阶段为二倍体、线粒体脊为管状等【2】。
由于其独特的生理形态特征,可同时对农作物和自然生态环境产生毁灭性的危害。
卵菌寄主寄主范围广,可引起十字花科、茄科、葫芦科、天南星科、百合科、芸香科、葡萄科、豆科、禾本科、菊科、仙人掌科、苋科等数百种植物发生各种病害【3】。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标:本文在前期研究的基础上,选取RXLR48为研究对象,利用PEG介导的辣椒疫霉菌稳定遗传转化体系,制备辣椒疫霉菌RXLR48基因沉默转化子,明确RXLR48在致病中的作用,为进一步探讨疫霉菌侵染的分子机制提供线索。
二、研究内容:1.辣椒疫霉RxLR48表达模式分析2.基因沉默通过PEG介导的原生质体转化技术沉默RxLR48基因3.筛选沉默转化子 用荧光定量PCR检测到RXLR48基因表达下调的转化子即为沉默转化子4.转化子的致病性分析通过菌丝块接种烟草叶片的方法测定RXLR48效应因子沉默转化子的致病力及菌丝定殖量三、拟解决的关键问题:1.得到稳定遗传的沉默转化子;2.RxLR48效应因子沉默后的表型分析。
3. 研究的方法与方案
(一)研究方法:1.基因沉默:通过PEG介导的原生质体转化技术沉默效应基因RxLR48,得到稳定遗传的沉默转化子;2.转化子的致病性分析:通过菌丝块接种烟草叶片的方法测定效应因子RxLR48沉默转化子的致病力及菌丝定殖量;(二)技术路线:1.辣椒疫霉中RxLR48的表达模式分析2.沉默RXLR48效应基因3.筛选获得稳定遗传的沉默转化子4.转化子的致病性分析(三)实验方案:研究材料:以辣椒疫霉LT263菌株为实验材料。
1.测定其在辣椒疫霉侵染本本氏烟过程中的表达模式;2.克隆RXLR48效应基因;3.利用优化的转化体系沉默RXLR48效应因子基因;4.筛选得到稳定的沉默转化子;5.通过菌丝块接种烟草叶片的方法测定个效应因子沉默转化子的致病力及菌丝定殖量;(四)可行性分析:课题立项明确,目标清晰,研究成果具有较强针对性和实用性,具有广泛的应用空间,即课题研究内容有价值;资料查阅充分,前人对这一领域研究主要为理论部分,具体结论等比较少,即该课题具有创新性和研发性;实验室器材、仪器、设备充足,满足提取RNA、PCR扩增及检测的必要条件,即该课题可以被顺利实施;综上,该课题具有可行性,可以顺利开展和完成。
4. 研究创新点
目前针对植物疫病防治的主要途径还是要靠培育和利用抗病品种,这两种途径的成效甚微,所以了解辣椒疫霉的致病机制对防治植物疫病的意义十分重要。
本研究以疫霉菌的效应因子作为切入点,探讨疫霉菌致病的分子机制,为今后建立新型的卵菌病害防控策略提供理论依据。
5. 研究计划与进展
2015.9-2015.11 学习实验技术2015.11-2016.01 完成效应因子RXLR48的沉默转化2016.01-2016.03效应因子沉默转化子的致病力及菌丝定殖量2016.03-2016.04测定效应因子在辣椒疫霉侵染本本氏烟过程中的表达模式2016.04-2016.05 编写毕业论文,与指导老师保持密切联系,修改毕业论文,保留原稿。
2015.06 指导老师审阅毕业论文,毕业生递交答辩申请。
2015.06 毕业答辩。
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