1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
双组分调控系统(two-component system,TCS)是原核生物中最主要的信号转导系统,典型的双组分调节系统通常由感应蛋白组氨酸激酶(histidine kinase,HK)和效应调节蛋白(response regulator,RR)组成[1]。
TCS由两个不同的基因编码,这两个基因通常是相邻的,而且常组成一个操纵子。
感应蛋白主要是膜蛋白激酶,由感受外界刺激不稳定的输入域和另一个高度保守的激酶活性中心多结构域组成,调节蛋白通常是胞质转录激活蛋白,由另一个高度保守的接受域和执行反应调节功能的输出域组成。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标: Cpx系统被认为在细菌毒力调控中起到重要调节作用,已有建议提出将Cpx双组分调控系统作为抗菌剂的研究目标。
CpxP蛋白是通过抑制CpxA的自动磷酸化而达到抑制Cpx途径的信号级联反应,同时该辅助蛋白CpxP也是尿路致病性大肠杆菌侵染肾脏时起关键作用的P菌毛形成时质量控制不可或缺的,证明CpxP涉及生物膜形成的早期步骤。
因此,通过丁香假单胞菌大豆致病变种CpxP研究该菌的cpx双组份调控系统,为在植物致病菌中阐明CpxP的抑菌机理及其精细调控机制及革兰氏阴性植物致病菌的生物防治奠定理论基础。
3. 研究的方法与方案
研究方法: 研究材料: 本实验室保存的从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv. glycinea)A1菌株。
方法和手段: 本项目将采用常规PCR等分子生物学技术克隆出cpxP基因,将该基因克隆到pET30表达载体后转化大肠杆菌BL21菌株。
用IPTG诱导重组表达载体体外表达CpxP蛋白。
4. 研究创新点
本项目课题的研究是建立在前期获得了必要的研究材料基础之上开展的,研究成果具有重要的科学价值和实践意义。
5. 研究计划与进展
(1)2014年09月1日至2014年09月25日:完成基因的预测与克隆及表达载体的构建工作。
(2)2014年09月26日至2014年10月20日:完成重组蛋白高效表达和蛋白分离纯化条件的优化工作。
(3)2014年10月21至2014年11月30日:完成蛋白质生物学效应的检测实验。
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