1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
大豆疫霉(phytophthora sojae)是一种非常重要的植物病原菌,由其侵染大豆引起的疫霉根腐病是大豆生产中的毁灭性病害之一。
在大豆疫霉侵染大豆根部的过程中,游动孢子通过识别根部分泌的异黄酮等物质,定向游动并休止,最终成功侵染大豆根部。
G蛋白信号途径在真核生物中广泛存在并且非常保守。
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2. 研究的基本内容和问题
用CO-IP的方法从大豆疫霉中获取与Gα互作的蛋白,再通过质谱的方法对这些蛋白进行检测,并对这些蛋白做功能域分析,从而找出一些可能比较重要的蛋白进行体外一对一蛋白互作验证,即GST Pull-down。
拟解决的关键问题 探索这些基因原核表达所需要和最适合的条件。
3. 研究的方法与方案
研究方法 1.对过表达的PsGPA1大豆疫霉菌株进行CO-IP实验,质谱分析。
2.选取4个候选基因序列进行设计上、下游引物,以大豆疫霉菌菌株 P6497 的cDNA为模板,用PCR扩增出相应的 DNA 片段,酶切片段并连接载体,送测。
3.将测序正确的克隆提取质粒,转化原核诱导菌株BL21。
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4. 研究创新点
之前实验室的研究结果表明,G蛋白信号传递途径对大豆疫霉游动孢子对异黄酮的趋化性有着重要的作用。
寻找与PsGPA1互作的基因,而所选4个基因都属于不同对的类型,很可能找到能够对研究游动孢子趋化性有帮助的基因。
5. 研究计划与进展
2014年9月-2014年10月,构建4个基因的载体,并得到测序验证结果。
2014年10月-2014年12月,原核表达成功,得到相应蛋白。
2014年12月,进行各个基因的pull-down实验。
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