1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）
文 献 综 述一、现状简介烟酰胺单核苷酸（NMN）用于治疗老化退行性疾病及延缓衰老已成为当下最为热门的研究领域之一，目前，生物催化法合成NMN存在酶催化剂缺乏，反应底物高昂等问题，故通过对烟酰胺核糖激酶结构的分析，模拟酶与反应底物的对接，探究酶学性质有利于指导酶的高效催化[2]。
烟酰胺单核苷酸，是哺乳动物体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸合成途径的重要中间体，烟酰胺核糖激酶是一种可调控烟酰胺单核苷酸生物合成的限速酶，它参与由烟酰胺核糖合成NMN的酶促反应，在NAD [1]的生物合成过程中，NMN作为重要的底物，在人体中可作为细胞能量的来源，近年研究证明，NMN具有显著的抗衰老功能，因而以NMN为活性成分的功能性保健食品有着很大的开发潜力和市场前景。
NMN可改善因NAD 缺乏所引起的心脑血管疾病、老年痴呆、II型糖尿病以及因年龄和饮食引发的肥胖，在许多临床研究当中，服用NMN可改善体内不同代谢器官的线粒体功能，并具有延缓衰老的作用，越来越多的证据表明，NMN具有广泛的保健应用和药物治疗价值，目前NMN在欧、美、日等发达国家已批准作为保健食品原料，并以NMN为主要成份开发出多种保健品[4][5]。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
⒈本课题要研究或解决的问题：要求在 NCBI中寻找所有烟酰胺核糖激酶的序列，进行序列比对和性质的预测；选取四个烟酰胺核糖激酶基因克隆得到重组质粒，在大肠杆菌中表达；对酶液进行纯化获得比较纯的酶液；分别研究这四种烟酰胺核糖激酶的酶学性质，包括最适反应温度与温度稳定性，最适反应pH与pH稳定性、动力学参数等。
通过本课题的研究，能够学习掌握有关蛋白质的生物信息学分析及酶学性质研究，学会使用高效液相色谱。
2.实验内容及要求（1）异源烟酰胺核糖激酶序列筛选比对，使用 ExPASy-ProtParam 在线软件进行氨基酸组成和理化性质的分析，通过NCBI Blast和InterPro对其保守结构域进行分析，明确活性位点，通过BioEdit软件绘制蛋白同源性多序列比对图，结合分子动力学模拟软件VMD对蛋白可视化分析；（2）蛋白表达纯化，熟练使用SDS-PAGE（聚丙烯酰胺）蛋白电泳，掌握蛋白纯化及浓缩操作；（3）最适反应温度的测定，温度稳定性的测定，测定最适反应 pH；（4）掌握高效液相色谱的使用。
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