1. 研究目的与意义
一、毕业设计的内容1、理论知识学习与实验前期准备根据课题实验内容，查阅嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）相关文献资料、摸索实验技术、搜集实验材料。
2、分子克隆和结果分析本实验将从现在临床试验的二代CAR-T设计出发，利用设计好的引物从合成的cDNA（依据人类基因组cDNA文库)克隆出CAR基因的所需片段，并将其拼接，转入载体表达并转染T细胞，通过改变CAR基因胞内共刺激区域与胞内恒定区（相当于是TCR的恒定区）之间连接肽的长度，以靶细胞杀伤实验，探究连接肽长度对CAR-T介导的细胞杀伤的影响。
二、研究意义CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）在白血病及其他癌症治疗中都具有广阔的前景；但它作为新兴的技术，仍然存在很多需要优化的地方。
2. 文献综述
CAR-T在肿瘤治疗中的研究进展047112228姚梦依摘要 伴随着肿瘤免疫疗法的大热，嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法作为其中极有前景的代表，是目前该领域的研究热门之一，也是较为有效的治疗肿瘤的方法之一。
经过基因改造之后的T细胞具有独特的优势，较之传统的化疗、放疗以及早期的细胞疗法，显示出诸多优越性，如较好的耐受性，较长的持续时间，但同时也存在细胞因子风暴、脱靶效应、脑病等副作用，甚至导致病患死亡。
本文将从CAR-T的发展过程及存在的问题，做一简要综述，并对其未来的发展进行展望。
3. 设计方案和技术路线
一、研究方案（1）根据临床试验的二代CAR-T设计出发，参考人类cDNA文库合成双链 cDNA。
（2）根据CAR基因序列，对CAR分子内多个片段分别设计PCR引物，对双链 cDNA进行扩增。
扩增产物经切胶纯化后回收，进行序列测定，即为CAR基因片段。
4. 工作计划
2022年1月5日 ～3月3日材料采集、文献搜集、相关实验技术的摸索2022年3月4日～ 4月15日序列查找、分子克隆2022年4月16日～4月30日细胞培养、转染并获得CAR-T 2022年5月1日 ～5月20日靶细胞杀伤实验、结果分析2022年5月20日～6月8日实验总结、撰写毕业设计书面报告
5. 难点与创新点
CAR-T在白血病及其他癌症治疗中都具有广阔的前景；但它作为新兴的技术，仍然存在很多需要优化的地方。
对其连接肽的研究，目前还未有阐明，是一项创新性较强的工作。
由于CAR为融合蛋白，其中连接肽的长度能够影响CAR-T细胞与靶细胞之间的亲和程度。
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