1. 研究目的与意义
课题组前期合成了水溶性良好的线粒体靶向性铜配合物CTB，通过ICP-MS、荧光光谱检测发现具有较强的靶向肿瘤细胞线粒体的作用，并且通过MTT法发现CTB具有明确的抗肿瘤作用，但是，CTB通过靶向线粒体发挥更强抗种瘤作用的机制尚不完全清楚，亟需进一步深入探究。
而肿瘤抑制蛋白p53是一个主要的诱导细胞死亡和衰老的转录因子，细胞质中的p53与Bcl-2蛋白家族成员相互作用，从而促进线粒体膜通透化。
另一方面也发现p53能迁移并作用于线粒体或线粒体蛋白上（如Bcl-2，Bcl-XL等）并直接触发CytC释放和线粒体细胞凋亡途径。
2. 文献综述
线粒体靶向性铜配合物激活p53诱导肝癌细胞线粒体凋亡作用机制研究【摘 要】癌症发病率和死亡率的升高，使得发展高效抗癌物质成为时代潮流，具有较好抗癌作用和靶向作用的铜配合物成为研究重点。
本论文通过相关实验证明一种含有线粒体靶向基团三苯基膦（TPP）的铜配合物通过激活p53诱导肝癌细胞发生线粒体凋亡而具有抗肝癌效果，并初步确定其有效剂量等范围。
首先通过MTT实验对比铜配合物对不同肝癌细胞（SMMC-7721、Bel-7402、HepG2）的作用效果，筛选出对药物最敏感的细胞株，确定有效的剂量范围。
3. 设计方案和技术路线
一、Western blot检测线粒体凋亡相关因子基因和蛋白的表达1.1. Western blot检测Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bak的表达1.2. 分别提取线粒体蛋白和胞浆蛋白，Western blot分别检测cytochrome c的水平1.3. Western blot检测Caspases的表达，包括pro-caspase-9、cleaved-caspase-9、pro-caspase-3、cleaved-caspase-3等，顺带检测细胞自噬标志物LC3-II、beclin1的表达（为后续做药物对细胞的自噬作用打基础）二、用p53特异性抑制剂（PFT-α）、转染p53 siRNA探究p53信号途径在药物诱导细胞线粒体凋亡中的作用2.1. Western blot法和免疫荧光染色法检测药物对p53表达的影响2.2.在p53抑制剂PFT-α处理下，JC-1染色法测定线粒体膜电位2.3.在p53抑制剂PFT-α处理下，TUNEL染色检测凋亡形态，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡2.4.在p53抑制剂PFT-α处理下，Western blot检测Bcl-2、Bax、线粒体cytochrome c、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3的表达
4. 工作计划
1月至2月：查阅文献，收集资料2 月至3月：撰写文献综述，开题报告3月至4月：设计实验，编写实验方案，进行实验，处理数据4月至5月：完成毕业论文写作，提交论文6月：完成论文答辩
5. 难点与创新点
本项目紧扣国内外研究前沿，首先药物是靶向线粒体的新化合物，然后从线粒体凋亡角度深入研究靶向线粒体铜配合物的抗肿瘤作用，并探讨p53在其中所起的作用，国内外尚未见相关报道。
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