1. 研究目的与意义
内容：通过细胞培养对LN-229细胞进行复苏，传代培养；通过MTT法对纯化所得WZ-3进行活性筛选；通过流式细胞仪观察WZ-3诱导细胞凋亡作用；通过Western blot法观察STAT3信号通路蛋白凋亡的变化；意义：STAT，即信号转导子和转录激活子，在信号转导和转录激活上发挥了关键性的作用。
目前已发现STAT家族的六个成员STAT1-STAT6。
其中的信号转导和转录活化因子3参与细胞增殖、分化、存活、凋亡、转化、细胞免疫等重要的生理病理过程。
2. 文献综述
文献综述刘乾阳STAT3研究进展信号转导和转录活化因子(signal transducersand activators of transcription,STATs)家存在于细胞浆并通过磷酸化激活能够转入核内与DNA结合的蛋白家族，具有信号转导和转录调控的双重功能。
STAT3是在1994年作为白细胞介素-6 (IL-6)信号传递中的急性期反应因子被纯化的，是酪氨酸磷酸化激活的STAT家族成员之一。
编码STAT3的基因在人类定位于第17号染色体。
3. 设计方案和技术路线
一、细胞培养对LN-229细胞进行复苏，传代培养。
二、活性筛选（MTT法）1、实验原理：MTT为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，但是死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
4. 工作计划
一、细胞培养2022.01-2022.02 对LN-229细胞进行传代培养。
二、MTT法活性筛选2022.03筛选具有抗肿瘤活性的WZ-3,确定适宜的给药浓度。
三、流式细胞仪观察细胞凋亡2022.04流式细胞仪观察WZ-3诱导细胞凋亡作用四、Western blot法观察凋亡通路蛋白的变化2022.04-2022.05对WZ-3抗肿瘤机制进行研究。
5. 难点与创新点
编码STAT3的基因在人类定位于第17号染色体，其结构与其他的STAT蛋白相似，具有以下几个主要部分:(1)保守的氨基酸末端:与STAT蛋白的四聚体化有关;(2)DNA连接区:具有特异性针对活性IFN-γ回文序列(GAS)元件的序列;(3)SH3结构域:位于第500～600位氨基酸，能与富含Pro的基序(motif) 结合;(4)SH2区:参与受体恢复和STAT的二聚体化;(5)C-末端转录激活结构域:在转录激活域内的色氨酸(S727)或接近C端的酪氨酸(Y705)被磷酸化后，STAT3即被激活。
[Stat3作为抗肿瘤药物分子靶标的相关内容。
] STAT3参与调节机体的许多生理功能，能够抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，在人类恶性肿瘤的发生、发展和演进中起到重要作用，其过量表达与肿瘤的发生关系密切。
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