1. 研究目的与意义
内容：1.学习肿瘤细胞的复苏、传代培养以及冻存和无菌操作；2.MTT法对纯化所得灰毡毛忍冬甲素进行检测；3.流式细胞仪观察灰毡毛忍冬甲素诱导细胞凋亡作用；4.Western blot法观察凋亡通路蛋白的变化，如：caspase家族，AKT家族以及mTOR信号通路。
意义：灰毡毛忍冬在临床上被广泛用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等疾病。
其具有保肝利胆、抗肿瘤、抗病原微生物、抗氧化、免疫调节等药理活性。
2. 文献综述
文献综述灰毡毛忍冬化学成分及其药理作用黄亚琴摘要对灰毡毛忍冬的化学成分以及药理作用进行了综述。
对灰毡毛忍冬的药理作用近年来所做的工作以及对灰毡毛忍冬的花蕾以及茎叶中提取出的成分进行的整理和分析。
关键词 灰毡毛忍冬；化学成分；药理作用；抗肿瘤作用；三萜皂苷类化合物；灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）俗称拟大花忍冬，为忍冬科忍冬属植物，具有清热解毒、抗菌消炎的功效，在中医临床及民间广泛用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等疾病的治疗[1]。
3. 设计方案和技术路线
研究方案一、培养细胞学习肿瘤细胞的复苏、传代培养以及冻存和无菌操作。
二、活性检测（MTT法）1、实验原理：MTT法又称MTT比色法其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
4. 工作计划
一、细胞培养2022.01-2022.02肿瘤细胞的复苏、传代培养以及冻存。
二、MTT法活性检测2022.03检测具有抗肿瘤活性的单体皂苷；摸索确定适宜的给药浓度。
三、流式细胞仪观察细胞凋亡2022.04流式细胞仪观察灰毡毛忍冬甲素诱导细胞凋亡作用四、Western blot法观察凋亡通路蛋白的变化2022.04-2022.05对灰毡毛忍冬甲素的抗肿瘤机制进行研究。
5. 难点与创新点
一方面，国内对灰毡毛忍冬的化学成分以及药理作用研究报道较少，不论是活性化合物的发现分离还是对其药理活性和作用机制的研究都还不全面，这就意味着我们仍旧有较大的探索空间。
另一方面，近年来，随着医疗水平的提高，肿瘤也成为研究的热门话题，研究清楚抗肿瘤药物的作用机制是一件有益于全人类的事情。
本课题对灰毡毛忍冬甲素的抗肿瘤活性和机制进行深入研究，为其抗肿瘤机制的确立奠定基础，为开发抗肿瘤新药提供依据
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