1. 研究目的与意义
研究内容:1) 确定丁酸钠处理肺泡巨噬细胞的合理浓度;2)丁酸钠对咪喹莫特(TLR7配体)活化的肺泡巨噬细胞表达产生IFN-β的影响。
研究意义:(一)肠道菌群代谢产物 SCFA 参与多种疾病进程,但其对 RSV 感染的影响尚无报道;(二)探索TLR7信号通路活化产生的 I 型干扰素在 RSV 感染中发挥的重要作用;(三)研究丁酸钠通过抑制 TLR7信号通路活化产生的 I 型干扰素调控 RSV 的感染进程;
2. 文献综述
SCFA在RSV感染相关的信号通路TLR7的影响摘 要:菌群代谢产物被认为是参与调节机体生命活动的重要物质,如短链脂肪酸( short-chain fatty acids,SCFA)。
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的肺炎是幼儿常见肺部疾病,我们前期研究发现RSV肺炎患儿中SCFA 减少,而其与RSV肺炎的联系暂无报道。
在RSV感染的进程中,TLR7活化的I 型干扰素(interferon, IFN)在 RSV 感染的进程中发挥了抗病毒免疫的作用。
3. 设计方案和技术路线
研究方案:探索丁酸钠对 TLR7 信号通路产生 IFN-β 的影响1) 分别用不同浓度的丁酸钠预处理肺泡巨噬细胞24小时,加入CCK8,10uL/孔,酶标仪检测,确定丁酸钠合理浓度。
2) 分别用不同浓度的丁酸钠预处理两个小时,随后用100ng/ml的咪喹莫特处理肺泡巨噬细胞,6小时后收集细胞,提取RNA,反转录成cDNA,用qPCR的方法检测其中的IFN-β的表达水平,同时检测 ISG56和ISG15的表达水平。
技术路线:在国内外研究的基础上,①我们发现肠道菌群的紊乱使SCFA含量下降。
4. 工作计划
第一阶段:文献综述,思路形成,制定大体实验方案第二阶段:初步试验,预试结果的分析第三阶段:进行正式的实验研究第四阶段:整理数据,撰写论文
5. 难点与创新点
1) 我们通过分析RSV感染的肺炎患儿中肠道菌群代谢产物的变化,首次发现RSV感染的肺炎患儿粪便和血液中SCFA降低,随后探讨SCFA(丁酸钠)对RSV感染进程的影响,属新思路;2) 探索肠道菌群代谢产物丁酸钠通过调控肺泡巨噬细胞分泌IFN-β影响RSV感染进程,提出新的理论。
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