1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1、研究意义四逆散出自东汉张仲景的《伤寒论》之少阴病篇第318条：“少阴病，四逆，其人或咳、或悸、或小便不利、或腹中痛、或泄利下重者，四逆散主之”。 四逆散具有透邪达表、宣通郁阳的作用。现代药理研究表明, 四逆散具有保肝、降血脂、改善动脉硬化、增强胃肠推进功能、增强免疫功能、抗休克、催眠、解痉和改善微循环等作用。临床应用常于胃炎、肠易激综合征、胆管疾病、肠道疾病、肝脏疾病、妇科疾病等[1]。四逆散是疏肝解郁, 调理肝脾之基础方, 疏肝解郁诸方配伍用药均仿此方用意。如《审视瑶函》之柴胡参术汤、《太平惠民合剂局》之逍遥散、《景岳全书》之柴胡疏肝散、《万病回春》之柴胡汤等。
四逆散主治少阳病, 阳郁厥逆之证。临床症状表现为手足不温, 或腹痛, 或泄利下重, 胁肋胀痛, 脘腹痛疼, 脉弦等。本证病机多由肝气郁滞, 克犯脾土, 脾土壅滞, 阳郁于里所致。方中柴胡入肝、胆经, 其性轻清疏散, 既疏肝解郁, 又升发阳气, 透邪外出, 使肝气条达, 郁热外达。芍药敛阴泄热, 补血养肝, 使肝体得养。柴胡、芍药相配, 散敛互用, 柔肝体和肝用, 气血兼调。配伍枳实行气散结, 甘草缓急和中, 全方有宣散气机, 透达郁阳的作用, 能使肝气调达, 郁阳得伸, 肝脾调和则肢厥自愈, 腹痛泄利下重逐止。其中白芍,酸苦微寒,归肝经,具敛阴抑阳、养血和营、柔肝止痛之功,为中医常用的药物之一,在临床上广泛应用。芍药的药理作用主要有镇痛、镇静、调节免疫系统、解痉、抗炎、抗病原微生物、护肝作用[2]。此外芍药苷是芍药的主要活性成分, 药理作用多样, 应用广泛。近年来国内外对四逆散的研究主要集中在质量控制、配伍规律、药效物质基础、药理机制等，且对于配伍规律上的多为药对的研究和药味配伍的比较，而对全方不同药量比例配伍对单位药的影响少有报道。据报道，中药配伍具有使有效成分溶出率升高、降低有毒成分含量、产生新的化学成分或使某些成分发生转化等作用[3]。通过拆方研究[4],四逆散在煎煮过程中产生了新的化学成分,且各成分间存在明显的相互增溶作用。且四逆散全方芍药苷溶出量明显高出其单煎物的溶出量，约是其8倍，柴胡、枳实、甘草中某些成分能增加白芍中芍药苷的溶出，能对芍药苷的溶出起综合促进作用。朱永志等[5]研究发现白芍配伍柴胡,游离苯甲酸煎出量均比白芍单煎明显降低,芍药总苷煎出量与白芍单煎比变化不大。白芍配伍柴胡合煎与白芍单煎相比,可显著降低有害成分苯甲酸的煎出量。方剂化学的研究是在中药配伍理论指导下,利用现代分析手段,从化学层面上进行中药复方配伍的研究,是中药复方配伍研究的基石。它使人们可以直观了解中药复方配伍不仅是药物的加和,更重要的是药物之间相互影响、作用,所组成复方成为一个有机整体 ,共同作用。临床实践及现代研究表明,方剂的配伍既不是药物作用在数量上的简单相加,也不是机械的毒副作用的抵消,而是通过药物间复杂的配伍作用,使之发生质的改变。因此,中药复方的构成是一个系统的整体。同时,组成复方的每味中药自身又由许多不同化学成分组成 , 而这些不同成分的有机组合也不同于单独各成分的简单累加,因此从这个角度讲, 构成复方的每味中药本身也是一个系统的整体。这种多层次的、系统的、复杂的整体使中药复方的研究,尤其是其作用机制的研究更加复杂化。而白芍在临床中组方治病,应用范围相当广泛,随配伍不同,而具有疏肝、清肝、养肝、柔肝、宁肝及和营卫、调气血、缓急止痛之功，在四逆散中的作用也众说纷纭。故而在实际工作中,我们应审慎辨证,正确立法,善用药物配伍组方,以达最佳治疗目的，且对制定相关质量标准提供帮助。 2、国内外研究概况芍药的主要化学成分为单萜及单萜苷类化合物，包括芍药苷，氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、白芍药苷等，还有苯甲酸、没食子酸，鞣质及一些挥发油成分。[6]关于四逆散中芍药配伍相关的研究有许多，特别是化学成分和药理药效上的研究。刘斌等[7]实验研究通过测定四逆散不同药味组合配伍中芍药苷的煎出量，得出四逆散不同药味配伍对芍药苷煎出有较大影响。芍药的煎煮过程中可能发生了水解，四逆散不同配伍芍药苷煎出量的降低可能与共存成分降低了芍药苷的稳定性有关。四逆散复方配伍有利于大多数极性较小成分的溶出。李军等研究表明[8,9,10],以甘草素、异甘草素为测定指标,枳实、白芍对甘草素、异甘草素均具有增溶作用,柴胡对其具有抑溶作用 ;枳实和白芍共同存在时不具有增溶作用,其效果同单味甘草 ;枳实和柴胡共同存在时体现的是柴胡的抑溶作用,其效果同柴胡 ;白芍和柴胡共同存在时体现的是白芍的增溶作用,其效果略低于白芍;全方共煎时体现的是增溶作用,效果同枳实或白芍。还以柴胡皂苷为测定指标研究了各配伍对其煎出量的影响。刘东峰等[11]比较了复方四逆中芍药苷与其单体形式之间药动学行为的差异。结果发现,复方配伍后芍药苷的生物利用度显著降低,说明芍药苷可能不仅以原形药的形式发挥药理作用配伍后其它化学成分还促进了芍药苷的代谢转化。王静蓉等[12]发现与单味白芍水煎液相比,白芍与甘草以3∶1,2∶1比例配伍,芍药甙含量基本无变化;比例为1∶1时,芍药甙含量略有下降。甘草与芍药配伍后,甘草酸含量较单味甘草水煎液略低。HPLC检测发现配伍组水煎液沉淀中仅含微量芍药甙,基本不含甘草酸。还有邱振文等[13]研究则发现不同剂量配比对芍药甘草汤中芍药苷的煎出无明显的影响。苏孝共等[14]研究发现白芍配伍柴胡,芍药苷煎出量均比白芍单煎高,平均提高12.68%,其中白芍与柴胡2∶1配伍比例芍药苷煎出量最大。结论说明白芍配伍柴胡有利于芍药苷煎出,从而使芍药苷煎出量增加。3、应用前景不同煎法影响四逆散的配伍情况，可能对某些化学成分具有增溶作用或可促进新成分产生、降低有毒成分含量。比较四逆散不同配伍的水煎液对芍药苷煎出量的影响，有利于探究芍药在四逆散中的配伍规律和作用机制，有利于临床上更好地配伍组方，更加灵活的运用芍药达到最佳疗效。参考文献：[1]孙志明，李小娜.四逆散复方的研究进展［J］．现代中西医结合杂志，2011，20( 9) : 3244-3246．[2]李乃谦.探讨白芍的药理作用及现代研究进展[J].中医临床研究,2017,9(20):137-138.[3]吴笛，刘法锦，廖彩震．中药配伍对化学成分的影响[J]．中成药，2003(02)：67-69．[4]张宏邈,赵令竹,谷松,卢健.四逆散及其拆方对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4的影响[J].辽宁中医杂志,2015,42(05):1122-1124 1149.[5]朱永智,陈鸿英,张桂贤,赵秀梅,胡人杰.白芍与柴胡不同比例配伍白芍总苷及苯甲酸水煎出量的比较[J].天津中医药,2011,28(01):78-79.[6]高小荣, 田庚元.白芍化学成分研究进展[J].中国新药杂志, 2006, 15 (6) :416-418.[7]刘斌. 四逆散不同配伍对芍药苷煎出量的影响[A]. 中华中医药学会.中华中医药学会中成药学术研讨会论文集[C].中华中医药学会:中华中医药学会,2007:4.[8]李军,石任兵,刘斌,姜华.四逆散不同配伍对甘草素和异甘草素煎出量的影响[J].北京中医药大学学报,2006(12):847-850.[9]李军,姜华,石任兵,刘斌.四逆散不同配伍对柴胡皂苷b_1,h提取量的影响[J].中国中药杂志,2008(15):1912-1914.[10]李军,石任兵,刘斌,姜华.四逆散不同配伍对柴胡皂苷a、b2及柴胡总皂苷煎出量的影响[J].北京中医药大学学报,2007(02):115-120.[11]刘东峰,张莉,陈婷.四逆散有效成分芍药苷代谢动力学研究[J] .中国实验方剂学杂志 , 2005 , 11(2):6 .[12]王静蓉,马琮瑜,严永清,朱丹妮.芍药甘草配伍化学变化研究[J].时珍国医国药,2000(02):10-12.[13]丘振文,罗丹冬,任结梅,张庆业.不同剂量配比对芍药甘草汤中芍药苷煎出量的影响[J].时珍国医国药,2008(06):1454-1455.[14]苏孝共,朱光辉,王增寿.白芍与柴胡不同比例配伍芍药苷水煎出量的比较[J].中国现代应用药学,2005(03):256-257.2. 研究的基本内容和问题
1、研究目标本实验旨在通过对四逆散中白芍分别与组方药物不同比例配伍，用高效液相法测定芍药苷其水煎液中的煎出量，通过比较其煎出率，研究柴胡、枳壳、甘草分别与白芍配伍的作用机制，根据临床疗效的不同而确定方剂配伍的最佳比例，并对四逆散的组方规律进行初步研究，从而指导科学配伍，拓宽方剂的临床应用范围。
2、研究内容2.1不同实验组煎煮不同时间芍药苷煎出量的比较制备白芍分别与四逆散中组方药物不同比例配伍的水煎液，在煎煮过程中，煮沸后每隔15min取一次样，一共取四次样，用0.22μm滤膜过滤，高效液相法测量其芍药苷含量，计算其芍药苷煎出率并进行分析比较。
2.2不同配伍比例对促进芍药苷溶出程度的比较制备白芍分别与四逆散中组方药物不同比例配伍的水煎液，取煮沸后煎煮1h后的水煎液，用0.22μm滤膜过滤，高效液相法测量其芍药苷含量，计算其芍药苷煎出率并进行分析比较。
3. 研究的方法与方案
1、研究方法及实验方案1.1 确定处方白芍、柴胡、枳壳、炙甘草按照四逆散方、柴胡芍药枳实甘草汤方和三个演变方逍遥散、柴胡疏肝散、血府逐瘀汤中的比例两两配伍和四味药合方配伍。1.2 试验材料白芍、柴胡、枳壳、炙甘草（以上材料皆为饮片，购买自磐安县经集方中药材有限公司，经吴健老师鉴定属实）。1.3 供试品溶液制备以四逆散标准方及其变方中各药的配伍比例为基础，将白芍分别与枳壳、柴胡、炙甘草以不同比例配伍，分别为白芍（5 g）单煎、总方、白芍-柴胡、白芍-枳壳、白芍-炙甘草按表1的比例进行配伍。加10倍体积水，浸泡30分钟，武火煮沸后改用文火，煎煮1 h，隔15 min提取测定一下芍药苷的含量，煎煮1h后，把第一次的煎煮液倒掉并简单清洗，第二次煎煮0.5h后提取测定芍药苷的量。
表 1不同实验组两两配伍比例处理 白芍-柴胡 白芍-枳壳 白芍-炙甘草 比例1 1:1(5 g:5 g) 1:1(5 g:5 g) 1:1(5 g:5g)比例2 3:8(15 g:40 g) 3:2(15 g:10g) 3:1(15g:5g)比例3 3:2(15 g:10 g) 1:3(5 g:15 g) 2:1(10g:5 g)
比例4 2:1(10 g:5 g) 3:1(15 g:5g) 1:2(5g:10 g)
4. 研究创新点
该实验对四逆散四味药的不同比例药量配伍进行了探讨，已有的实验研究多是药味组合配伍和其中药对不同比例的研究，本实验进一步探究不同比例四味药共同作用对芍药苷煎出量的影响，从而对四逆散中芍药的配伍作用机制进一步研究，根据临床疗效的不同而确定方剂配伍的最佳比例提供了更多的理论基础，从而指导科学配伍，拓宽方剂的临床应用范围。
5. 研究计划与进展
本实验预计在2018年11月1日-2018年5 月1日完成：（1）2017.11.01-2017.12.10查阅文献，撰写文献综述，设计实验方案。
（2）2017.12.10-2017.12.15 实验材料搜集和仪器准备。
（3）2017.12.20-2018.12.22 预实验。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
