1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
芍药苷(Paeoniflorin),蒎烷单萜苦味苷,白色结晶粉末,来源于毛莨科植物芍药根、牡丹根、紫牡丹根,具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿 的作用,疗效显著。
通过上述方法,找出芍药中,芍药苷对钙离子的受体产生拮抗的作用点,进而能更深入地阐明芍药苷对钙离子的拮抗机制,并可以证明植物细胞中,或许存在着与动物细胞类似的凋亡通路。
芍药苷是钙离子受体的拮抗剂[ ],但其拮抗作用的具体机制却知之甚少,目前国内外对于芍药苷在植物细胞中是如何起到对钙离子受体拮抗作用的相关研究很少,本课题即从植物细胞凋亡作为切入口,已知植物细胞在高盐状态下会发生细胞凋亡[ ],探究芍药苷在高钙盐胁迫下,可能在植物细胞凋亡中对某个钙离子相关的受体起作用,为芍药苷的具体作用机制提供一定科学的依据。
2. 研究的基本内容和问题
本课题旨在找出确定芍药苷的在高盐胁迫中对钙离子起到拮抗作用的位点。
芍药根系在受到高盐胁迫后会引发细胞凋亡,比如高钙胁迫。
芍药苷可以在一定程度上起到抑制高盐胁迫引起的细胞凋亡,而钙离子作为第二信使,是细胞凋亡途径中十分重要的因子。
3. 研究的方法与方案
研究方法:通过蛭石与霍格兰德营养液培养芍药小植株,在蛭石中喷洒不同浓度的钙离子,并分别加入氯丙嗪(钙依赖蛋白激酶抑制剂)和青霉素(类半胱氨酸蛋白酶抑制剂),观测芍药根形成层与木栓形成层中钙离子、和芍药苷的含量,观测这些部位细胞生理变化,通过这些物质的浓度变化规律与细胞生理变化现象,对比找出芍药苷对钙离子产生拮抗的作用点。
基本步骤如下: 1.取芍药根的形成层与木栓形成层及其他部位,对钙离子浓度分析:通过ICP-AES电感耦合等离子体发射光谱法来测定芍药根各个组织中钙离子的浓度,并且和对照组进行对比。
不同组的细胞内钙离子浓度与空白对照组钙离子浓度的浓度差则为细胞内钙离子浓度的变化。
4. 研究创新点
关于芍药苷对钙离子受体的具体作用机制不多,也不明确,本课题把细胞凋亡作为切入点,利用高盐胁迫中的高钙胁迫刺激芍药根系细胞发生凋亡,促使钙离子的第二信使作用被放大,来发现芍药苷可能对钙离子受体的具体作用位点。
5. 研究计划与进展
2015年3月~5月:进行预实验。
首先将芍药分组并按照要求分组处理。
拍照记录芍药及芍药根系的状态。
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