1. 研究目的与意义
1.（1）选用HepG2细胞，运用药物（CTB）处理，检测自噬相关指标，以明确药物对肝癌细胞自噬的影响。
（2）培养HepG2细胞，运用自噬诱导剂雷帕霉素（RAPA）或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA），同时药物（CTB）处理，检测线粒体凋亡相关指标，以明确自噬在药物诱导肝癌细胞线粒体凋亡中的作用。
2.研究表明，线粒体靶向性铜配合物CTB对不同的肿瘤细胞具有明确的抗肿瘤作用。
2. 文献综述
另附附件
3. 设计方案和技术路线
1.选用HepG2细胞，运用药物（CTB）处理，检测自噬相关指标：(1)电镜观察自噬体形态、囊泡数目；(2)荧光显微镜测定自噬体LC3荧光强度；(3)Real-time PCR、Western blot、免疫荧光染色法检测细胞自噬关键亚单位：LC3-I/II、Atg5、Atg6/Beclin1、P62的表达。
以明确药物对肝癌细胞自噬的影响。
2.培养HepG2细胞，运用自噬诱导剂雷帕霉素（RAPA）或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA），同时药物（CTB）处理，检测线粒体凋亡相关指标：（1）JC-1染色检测药物对线粒体膜电位和通透性的影响；（2）细胞ROS水平的检测；（3）Western blot检测线粒体CytC的释放； （4）Real-timePCR、Westernblot检测Bcl-2家族（抗凋亡Bcl、Bcl-xl等；促凋亡Bax、Bid等）以及Caspase家族（cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9等）基因及蛋白表达。
4. 工作计划
5. 难点与创新点
本项目首次提出从自噬介导的线粒体凋亡角度深入研究线粒体靶向性铜配合物的抗肿瘤作用及其分子机制，科学问题具有前沿性和新颖性。
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