1. 研究目的与意义
【研究内容】1．明确lncRNA-H19与肝纤维化的关系体外培养LX2细胞系，分别转染lncRNA-H19干扰和过表达质粒，观察细胞形态，western blot和Real time PCR分别检测α-SMA、α1(Ⅰ)Collagen-I、TIMP-2、 MMP-9、fibronectin蛋白和mRNA表达水平。
2．明确HIF-1α对肝星状细胞活化的影响2.1 体外培养分离出的原代HSC，western blot和Real time PCR分别检测HIF-1α的蛋白和mRNA水平。
2.2体外培养LX2细胞系，并使用HIF-1α的抑制剂ACF，检测上述肝纤维化指标。
2. 文献综述
HIF-1α在肝纤维化中的作用研究进展摘要：肝脏代谢需要充足的氧气供应,一旦缺氧，肝脏将面临十分严重的损伤。
一方面慢性肝损伤伴有缺氧；另一方面，缺氧反过来又加重肝损伤, 抑制肝细胞再生, 促进肝纤维化、肝硬化乃至肝癌的发生；两者互为因果, 互相促进, 是各种慢性肝病发展的重要机制。
作为体内最重要的缺氧信号传递因子,缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)参与肝脏许多缺氧适应性调节活动，尤其是在肝纤维化中。
3. 设计方案和技术路线
【研究方案】1. 明确lncRNA-H19与肝纤维化的关系六孔板体外培养LX2细胞系，按照lip2000说明书分别转染lncRNA-H19干扰和过表达质粒。
观察细胞形态，western blot和Real time PCR分别检测α-SMA、α1(Ⅰ)Collagen-I、TIMP-2、MMP-9、fibronectin蛋白和mRNA表达水平。
2. 明确HIF-1α对肝星状细胞活化的影响2.1体外培养分离出的原代HSC，western blot和Real time PCR分别检测HIF-1α的蛋白和mRNA水平。
4. 工作计划
2022年2月-3月 查阅文献完成综述撰写，设计实验思路并熟悉实验流程，完成实验第一部分：明确lncRNA-H19与肝纤维化的关系2022年3月-4月 完成实验第二部分：明确HIF-1α调控lncRNA-H19表达进而影响肝纤维化过程2022年5月-6月 完成实验第三部分：明确HIF-1α调控lncRNA-H19表达进而影响肝纤维化过程。
整理数据，撰写毕业论文。
5. 难点与创新点
本项目建立在申请者实验室前期对肝纤维化的研究基础上，紧扣国内外研究前沿，结合研究热点lncRNA，前瞻性地提出HIF-1α介导LncRNA-H19对肝纤维化的调控作用的科学假说，具有一定的新颖性和创新性。
本项目立足于纤维化肝脏中lncRNA-H19的异常表达情况，重点研究HIF-1α、lncRNA-H19、肝纤维化三者之间的密切关系，立项依据充分，有较高的可行性。
其研究结果将为治疗肝纤维化提供新靶点，为肝病的临床治疗及有效治疗药物的开发提供一定的实验依据。
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