玉米赤霉烯酮降解关键酶基因的异源表达与功能验证开题报告

 2023-06-29 13:07:04

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

一、研究背景玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN,ZEA)又称F-2毒素,最初由 Baldwin 等从发霉玉米中分离得到[1],是由粉红镰刀菌(Fusarium roseum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、三线镰刀菌(Fusarium tricinctum)等镰刀菌属微生物所产生具有雌激素毒性的真菌毒素[2],是污染粮食最广泛的真菌毒素之一。

主要污染玉米、小麦、燕麦等谷物,尤其玉米的阳性检出率最高,也可通过饲料污染畜禽类产品。

玉米赤霉烯酮的毒性主要作用于生殖系统和中枢神经系统,还具有较强的致癌性,可引发乳腺癌、食道癌等疾病[3],给人们健康带来很大的影响。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一、 需解决的问题1、单加氧酶BVMOs基因在BL21中高效表达的最适条件的确定;2、如何提高表达产物的可溶性;3、表达产物的功能性如何; 4、表达产物降解ZEN的最适条件的探索。

二、研究途径1、重组质粒pET29a-snap1820的构建:通过PCR扩增的方式得到目的基因序列,构建pET29a-snap1820载体,在大肠杆菌E.coil DH5α中富集得到大量重组质粒。

2、大肠杆菌表达系统的构建:将重组质粒从大肠杆菌E.coil DH5α中提取纯化,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。

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