易错PCR法筛选蔗糖磷酸化酶突变体的研究开题报告

 2023-03-27 09:21:59

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

糖苷类化合物在自然界中广泛存在,并具有多种功能。

例如,大量的抗生素是糖苷类药物,糖苷基对其药物活性至关重要并介导一些肿瘤药物的靶向作用和抗生素选择性[1]。

一些不耐热分子(如抗坏血酸)连接糖苷基可以极大地改善其稳定性,从而实现长期保存[2]。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

本课题研究了使用易错PCR法筛选各种酶活性的蔗糖磷酸化酶突变体,并对其进行保菌测序。

研究手段:通过易错PCR形成LmSP突变片段,连接至适当质粒后转化于E.coli Mach1-T1细胞中,待板子长出克隆子后,挑阳性克隆子至96深孔培养板,随后进行发酵及诱导。

发酵结束后,以甘油和蔗糖为底物进行全细胞底物催化,利用DNS法对催化反应液进行显色从而间接筛选出每批所产生酶的酶活最高的克隆子中,最后进行数据处理筛选Spase酶突变体,建立突变体酶库,完成初筛。

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