1. 研究目的与意义
内容:1、初筛孢子粉中的成分2、对蝉花孢子粉提取条件的优化、指纹图谱的建立3、对孢子粉抗溃疡性结肠炎活性的测定4、进行谱效关系分析及孢子粉中活性成分测定意义:蝉花孢子粉对溃疡性结肠炎具有一定药效,但其有效成分中具有抗溃疡性结肠炎的具体成分尚不明确,确定此药效成分,可以为质量控制和临床应用打下基础。
2. 文献综述
蝉花子实体功能活性及其谱效分析研究进展【摘 要】:蝉花为麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae Shing)及其寄主山蝉(Cicada flammata Dist)若虫的干燥体, 它是我国传统的中药材之一,冬虫夏草的无性型同属,功效相近。
研究认为其性味甘寒, 中医用于散风热、定惊镇痉、治风热咳嗽、小儿夜啼、壮热惊悸、手足抽搐。
本研究拟研究蝉花子实体中化学成分的功能活性。
3. 设计方案和技术路线
1.初筛孢子粉并提取其主要的化学物质1.1供试液的制备分别以水为溶剂,以乙醇为溶剂和以石油醚为溶剂提取孢子粉1.2配备检识试剂盐酸-镁粉试剂、Borntragers、三氯化铁试剂、溴酚蓝试剂、氯化钠-明胶试剂、苦味酸试剂、碱性苦味酸试剂、Salkowski等1.4对粉中所含成分进行提取蛋白质的提取:将样品装入冻存管,在液氮中放置2小时;将样品和细胞裂解液(1:2)加入离心管中,在4放置十分钟;在10K rpm离心5分钟;去除上清液;用200μl冷丙酮洗涤沉淀;在离心机中离心5分钟;重复4-6步骤,总共进行2次丙酮洗涤;放入冰箱冷冻,数小时后溶出白色颗粒。
糖的提取:取10g粉末,加入水100ml,煎煮回流2h过滤,加入70ml煎煮回流1.5h,合并滤液抽滤,65减压蒸馏上清液加入四倍体积的95%乙醇4沉淀12h,4000r离心15min,倾去上清夜,得到粗多糖沉淀。
干燥。
4. 工作计划
第一阶段(12月1月):查找相关资料,设计实验方案。
第二阶段(3月4月):试验阶段,按照试验设计进行药材的初鉴定、提取、纯化。
第三阶段(4月5月):将药效成分进行谱效分析,活性成分进行定性定量分析。
5. 难点与创新点
目前认为蝉花是冬虫夏草的替代品,市场需求广阔。
本实验采用人工栽培的蝉花,并首次试图分离蝉花的各部位,对各部位进行化学成分和药效分析,其有效成分中具有抗溃疡性结肠炎的具体成分尚不明确,为明确蝉花中各部分成分的作用机制提供新的理论依据,从而为后续开展的实验研究开拓新的思路,具有重大的价值和研究应用前景。
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