Wapl在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的功能研究开题报告-来开题

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

Wapl最早被发现于果蝇体内，其被认为可以调控有丝分裂染色体形态（1）。

Wapl是调节Cohesin从染色体上解离的关键分子，并且对维持染色质结构至关重要（2）。

Cohesin是一种多亚基蛋白复合物，主负责将姐妹染色单体连接在一起，确保它们在后期精确分离（3）。

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本课题拟初步探索Wapl在卵子成熟中的作用，明确其是否参与调控纺锤体形成和纺锤体检验点（SAC）激活，为全面认识和了解cohesin相关蛋白与SAC协同调控卵子减数分裂进程的机制以及预防非整倍体配子的产生提供理论依据。

研究方法：(1) 收集GV期的卵母细胞，Wapl-Morpholino处理后，经米力农抑制，在M16培养液中培养12h，收集卵母细胞，通过western bolt 检测和对照组比较Wapl的表达情况变化，独立重复至少三次实验。

(2) 收集卵母细胞，Wapl-Morpholino注射后，经米力农抑制，并培养到第一次减数分裂中期，应用免疫荧光染色后，观察处理和对照的纺锤体形态和染色体排列的异常率，独立重复至少三次实验。

(3) 收集卵母细胞，Wapl-Morpholino注射后，经米力农抑制，并培养到第一次减数分裂中期，冷处理，应用免疫荧光染色后，观察处理和对照的动粒和微管连接情况，独立重复至少三次实验。

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本实验以当前研究进展为前提，在现有结论的基础上提出新的研究方向，为进一步研究Wapl在卵母细胞成熟中的作用及其参与减数分裂机制，了解Cohesin和SAC调控减数分裂机制以及预防非整倍体配子的产生提供理论依据。

2017年10月至2018年 1 月：练习并掌握练习并掌握卵母细胞的采集以及体外成熟培养，免疫荧光染色等技术手段的操作。

练习操作显微注射仪的使用操作。

学习分子克隆、基因工程等相关操作2018年 3 月至2018年 4 月：基本完成实验，包括数据分析等一系列工作2018年 4 月至2018年 5 月：论文撰写，并准备答辩相关事宜

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