1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
环境因素与畜禽的生命活动和生产性能有着密切的联系,而在夏季炎热的气候,热应激是主要的应激因子之一,其定义为:作用于动物的外力的总和,其引起体温升高并引起的生理反应[1]。
动物机体存在一个等热区,在等热区内机体能够维持自身热平衡和体温恒定,当环境温度过高超过等热区上限临界温度时,将导致机体热量的流入与流出失衡[2],引起机体一系列的不良反应,严重影响着动物的生长与健康。
猪是一种恒温动物,正常体温39℃,但由于皮肤汗腺不发达,皮下脂肪厚,被毛稀疏,属于不耐热动物,对热应激特别敏感[3, 4]。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标:建立母猪妊娠后期热应激环境,观察子宫内热应激对新生仔猪的影响。
2.研究内容:(1)观察母猪妊娠后期热应激对新生仔猪小肠体重、小肠重量及小肠长度的影响;(2)采集小肠不同部位,用HE染色观察母猪妊娠后期热应激对新生仔猪小肠形态(绒毛高度、隐窝深度和绒毛/隐窝比)的影响;(3)用乳糖酶测试盒测定空肠回肠乳糖酶活性,探究母猪妊娠后期热应激对新生仔猪空肠回肠乳糖酶活性的影响;(4)用酶联免疫测试盒(Elisa)测定血液LPS,DAO,I-FABP水平,探究母猪妊娠后期热应激对肠道损伤及完整性的影响。
3.拟解决的关键问题研究母猪妊娠后期热应激对新生仔猪小肠发育和完整性的影响
3. 研究的方法与方案
1 研究方法及实验方案选用12头健康状况、体况相近的长大二元妊娠85天的初产母猪,随机分为两组,每组6头,分别为对照组(温度保持在15-22℃)和热应激组(温度保持在26-30℃)。
所有母猪均为自然分娩,所有试验小猪均为新生仔猪,出生后对所有新生仔猪进行称重,每窝随机选取接近平均体重的2头新生仔猪,公母对等,在生后的2-4h内进行颈静脉采血,然后屠宰取样。
按常规程序进行屠宰,仔猪屠宰后,结扎分离出小肠,先称重再量长度,采集小肠(十二指肠、空肠和回肠)各段,各取中间段约2cm置于4%的多聚甲醛溶液中固定,用于制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色观察各肠道形态,各肠段剩余部分用手术器械剖开以无菌生理盐水( PBS)冲洗,用手术剪剪碎于EP管中,用于空肠回肠乳糖酶的测定。
4. 研究创新点
热应激作为炎热的夏季一个重要的应激因子,严重影响着动物的生长和发育,但迄今为止母猪妊娠期热应激对新生仔猪小肠发育影响的研究还很少,本试验旨在研究母猪妊娠后期热应激对新生仔猪肠道发育及完整性的影响,在选题方面有一定的创新。
5. 研究计划与进展
第一阶段:2017.05-2017.07试验动物开展,样品采集等。
第二阶段:2017.07-2017.12各肠段石蜡切片制作,空肠、回肠乳糖酶测定,血液指标的测定。
第三阶段:2018.01-2018.04数据分析、论文撰写。
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