苯并[a]芘损害卵母细胞发育和受精的作用机理开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

近年来，中国的空气质量和雾霾作为城市发展不可避免的副作用受到了越来越多的关注（1）。

工业生产，交通运输，煤炭燃烧和二氧化硫排放等人类活动释放出各种有毒有害物质（2,3），由大气运输并沉积到人们居住和工作的地区（4-7）。

在这些大气污染物中，多环芳烃（PAHs）由于其持久的毒性受到极大关注，严重威胁到人类健康并引起许多疾病（8-10），包括生殖缺陷（ 11-13）。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标通过研究卵母细胞减数分裂过程的关键生物学事件如纺锤体组装和染色体排列等，阐明环境毒素苯并(a)芘影响卵母细胞减数分裂成熟和受精的作用机理，为改善家畜卵子质量和提高家畜繁殖性能提供理论基础。

研究内容本项目以雌性ICR小鼠为实验动物，通过卵母细胞体外成熟、免疫荧光染色和免疫印记等技术，综合应用分子生物学和细胞生物学等手段，研究BaP对雌性小鼠卵母细胞的发育的影响，为提高家畜的繁殖性能提供理论基础，我们将从以下几个方面来开展研究：1.利用卵母细胞体外培养体系，探索BaP对小鼠卵母细胞减数分裂进程（GVBD、PB率）的影响；2. 采用免疫荧光染色技术，探索BaP对小鼠卵母细胞减数分裂中纺锤体组装和染色体排列产生的影响；3. 采用免疫荧光染色技术，探索BaP对小鼠卵母细胞减数分裂中动粒-微管连接的影响。

4. 通过体外受精实验，探索BaP是否对小鼠卵母细胞受精过程产生影响。

3. 研究的方法与方案

研究方法通过灌胃实验给3周龄雌性ICR小鼠连续10天摄入BaP（BaP融入玉米油中喂给小鼠，每天早晨9点开始灌胃），第11天雌鼠通过断颈致死，取出两侧卵巢，在显微镜下捡取形态、大小正常的 GV 期卵母细胞，放入培养箱中培养；利用免疫荧光和免疫印迹等实验手段，分别从两个方面观察BaP摄入后对小鼠卵母细胞成熟的影响，包括对生发泡破裂、排出第一极体等减数分裂进程的观察，以及减数分裂重要生物学过程如染色体排列、纺锤体组装、动粒连接的影响，明确BaP引起小鼠卵母细胞质量下降并导致卵子成熟障碍的根本原因。

以及通过体外受精实验，明确BaP是否引起小鼠卵子受精力降低，为了解环境污染物降低卵母细胞质量从而损害卵子的成熟和受精能力提供研究基础。

技术路线ICR小鼠灌胃BaP 收集卵母细胞卵母细胞成熟过程1、GVBD率、PBE率2、染色体排列、纺锤体组装3、动粒-纺锤丝连接卵子受精过程1、受精率2、精卵结合的数量实验方法1．BaP口服给药从口服剂量的BaP在玉米油载体中处理的4-6周龄雌性ICR小鼠收获卵母细胞。

4. 研究创新点

从研究卵子成熟和卵子质量角度揭示BaP对雌性生殖系统的负面作用，具有学术视角的创新型。

5. 研究计划与进展

2018.3购入所需的药品、试剂、抗体，准备好雌性小鼠待用2018.3-2018.4对小鼠进行BaP灌胃，持续10日，完成以下实验：卵母细胞发育过程：① 光镜下拍摄卵母细胞发育的进程，统计GVBD率、PBE率；② 免疫荧光染色染色体、纺锤体和动粒等；体外受精实验：①观察精卵结合情况及受精率2018.4-2018.5① 实验数据的统计、整理；② 论文的撰写

您可能感兴趣的文章

• 池塘工业化循环水养殖对水体氮磷营养盐含量变化的影响开题报告
• 母猪妊娠后期热应激对新生仔猪发育及肠道完整性的影响开题报告
• Wapl在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的功能研究开题报告
• 凹凸棒石呕吐毒素吸附剂对肉鸡生产性能、小肠黏膜抗氧化功能及形态结构的影响开题报告
• 无抗发酵饲料对生长育肥猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响开题报告
• 苯并[a]芘损害卵母细胞发育和受精的作用机理开题报告
• Toll样受体家族在单多胎湖羊生殖器官中的表达研究开题报告
• 循环水养殖池塘底泥有机质各种成分春季和秋季变化的研究开题报告
• 高温对体外培养奶牛卵巢颗粒细胞基因表达的影响开题报告
• 长江刀鲚DnaJa1和DnaJb1基因的克隆与表达分析开题报告