叶下珠提取物对四氯化碳诱导建鲤肝损伤保护作用研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（一）课题意义：

随着集约化养殖程度的不断提高，养殖密度的加大，养殖环境日趋恶化，鱼类病害已成为限制水产养殖业进一步发展的瓶颈。近年来，由于环境污染，高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥用等因素所造成的鱼类肝胆综合症在全国许多地区频繁发生，造成了鲤、鲫、草鱼、团头鲂和青鱼等多种鱼类的大面积死亡，死亡率高达60-90%，给水产养殖业造成极大的经济损失。关于鱼类肝胆综合征的治疗，目前未发现有效治疗药物，主要是以西药抗生素为主，西药虽然在一定程度上缓解了肝损伤，但是不能够彻底治愈肝损伤，容易在鱼体内产生耐药性和造成药物残留，威胁人类健康，因此，开发绿色无公害的中成药已迫在眉睫。叶下珠（学名：Phyllanthus urinaria L.），别名：珠仔草、假油甘、潮汕、龙珠草、企枝叶下珠，碧凉草等。药用全草，微苦甘、性凉、无毒，入肝脾经。研究证明叶下株具有明显的抗肝炎病毒和抗肝损伤作用^[1-3]，本研究主要以建鲤为研究对象，以药物四氯化碳（CCl₄）来模拟建鲤的肝损伤，研究叶下株提取物的保肝作用。通过测定生化指标来研究猪苓多糖在建鲤体内的抗氧化机制，为鱼类肝胆综合征的治疗提供理论依据。

（二）国内外研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

（一）研究的目标：实验数据真实准确，实验结果能有效反应出叶下珠提取物对四氯化碳诱导建鲤肝损伤作用的相关效应。通过实验锻炼自己科学研究技能和科研论文写作能力。

（二）研究内容：实验研究内容包括叶下珠提取物的制备，精密肝切片的制备与培养，试验结果数据处理。

（三）拟解决的关键问题：

3. 研究的方法与方案

（一）、研究方法、技术路线和实验方案：

1、提取物的制备:将叶下珠全草洗净阴干，粉碎，得叶下珠试样。称取3份适量样品，分别用水、体积分数为0.95 的乙醇、体积分数为0.7的乙醇各回流提取3次, 分别得到各自的提取物。（将各提取物配成1kg/L(以生药量算)，加少量DMSO助溶终浓度不得超过0.1%备用, 实验时在稀释到所需浓度。）

2、叶下珠体积分数为0.7 乙醇提取物的分离: 称取叶下珠适量, 用体积分数为0.7 的乙醇回流提取3 次, 将其提取液浓缩至干, 然后用200~300 mL 水溶解, 其溶解液分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次提取, 将各提取液浓缩制成干粉, 得各自提取物。将各提取物配成1 kg/L( 以生药量计算) , 加少量DMSO助溶终浓度不得超过0.1%, 备用。

4. 研究创新点

首次在鱼类上运用精密肝组织切片技术来研究抗四氯化碳诱导的肝损伤，本试验借鉴前人试验的方法和经验，将其涉及领域引入水生动物方面，通过探索，为临床上中草药防治鱼类肝脏疾病提供理论依据。

5. 研究计划与进展

1、2013年7月3日，与指导老师面谈，探索试验方法步骤与思路；

2、2013年7月4日至2013年8月1日，收集相关资料，阅读文献，在不断修正中形成较为具体的研究方法，形成开题报告初稿；

3、2013年8月2日至9月22日，在导师的指导下，购买试验材料，药材与试剂，所需仪器与设备，熟悉试验基本操作方规范，进行初期试验，完成开题报告。

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