克氏原螯虾蜕皮激素受体基因克隆及对蜕皮信号的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、研究意义 在甲壳动物个体发育过程中, 存在蜕皮现象, 即蜕去旧的外骨骼并长出新的外骨骼的过程。

蜕皮是甲壳动物生长和发育的标志特征, 它贯穿甲壳动物个体发育的始终, 它受神经系统和内分泌系统共同调节。

甲壳动物的蜕皮通过蜕皮激素诱导。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标通过研究其调节机制，准确理解在外界因子的作用下, 神经内分泌系统的活动对生殖和蜕皮的调控机制, 并应用于经济虾蟹的养殖生产中, 如开发检测养殖种类MIH 的试剂盒, 人工控制它们的光周期、温度、营养等, 使其生殖和蜕皮处于最佳时机, 抑制性早熟的现象, 从而提高经济虾蟹的生产效率。

二、研究内容（1） PcEcR和PcRXR的全长cDNA的克隆（2） PcEcR和PcRXR的序列比对和进化树（3） PcEcR和PcRXR在不同组织中的表达（4） PcEcR和PcRXR的眼柄切除后的诱导表达三、拟解决的关键问题确定去除眼柄后，PcEcR和PcRXR在不同组织中的表达。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法去除克氏原螯虾的眼柄，克隆蜕皮激素受体（PcEcR）和retinoid-X受体（PcRXR）的全长cDNA，进行序列对比和进化树，测定克氏原螯虾的肝脏、眼柄、卵巢、肌肉、神经、肠、心脏、鳃等8个组织中克隆蜕皮激素受体（PcEcR）和retinoid-X受体（PcRXR）的表达。

二、技术路线克氏原螯虾的暂养眼柄的去除样品的采集与收集样品的预处理样品的测定数据分析得出结论三、实验方案1、 采集未发育成熟的克氏原螯虾，放在实验室饲养；2、 将克氏原螯虾的眼柄切除，处理好伤口，保证其能存活，放回实验室饲养，并做记录；3、 在第0天，第1天，第3天，第7天分别采集小龙虾的肝脏、眼柄、卵巢、肌肉、神经、肠、心脏、鳃等8个组织，放入－80度冰箱保存；4、 将样品放入1mlTRI、20L Reagent中，加0.2ml氯仿；摇晃混匀15s,室温下放2-3min；1200xg,4度离心15min；取上层清夜至新管，加1.5ml异丙醇，放10min； 倒去液体，剩地下的白色RNA；5、 加1ml75%乙醇，在－20度条件下最少可放一年，在4度条件下至少可放一周。

RNA极易在RNA酶的作用下被降解，操作要低温、快速；倒去酒精，10min晾干；加DEPC处理水，用分光光度计测定浓度，判断RNA的质量，做电泳，观察RNA的完整性；6、 若RNA的完整性较好，做反转录。

4. 研究创新点

5. 研究计划与进展

1、第一阶段：2013年9月31日前，通过调查、分析，完成论文选题，并制定初步的研究计划；2、第二阶段：2013年6月完成样品的采集、实验和数据的采集；3、第三阶段：2014年2月日2014年1月20日，及数据的测定并完成开题报告；4、第四阶段：2014年1月21日2014年2月20日，整理数据材料，用SPSS软件进行数据呢处理；5、第五阶段：2014年2月21日2014年4月30日，根据统计软件得出的结果及其他材料，完成论文初稿；6、第六阶段：2014年5月1日2014年5月15日，对论文中的数据及结论进行验证，对论文初稿进行合理修改；7、第七阶段：2014年5月16日2014年5月25日，完善论文并最终定稿，同时准备参加论文答辩所需要的材料。

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