1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
法氏囊是目前公认的禽类特有的中枢体液免疫器官，可产生B淋巴细胞，从而产生特异性抗体来完成特定的免疫应答，对B细胞分化发育具有意义。法氏囊多肽是一种小分子多肽，可作为免疫增强剂具有广泛的免疫增强作用，对多种畜禽具有刺激淋巴细胞增殖、调节细胞因子和提高疫苗免疫效力作用。新型法氏囊活性肽的研究是体液中枢免疫系统研究的重要环节,在人类和哺乳动物中，体液中枢免疫器官尚无定论，法氏囊为研究人类的体液免疫系统提供了理想的模型，对研究人类和哺乳动物的中枢体液免疫器官具有重要的指导意义。已经证实法氏嚢组织中存在一些免疫调节因子，鉴于分离纯化比较困难，法氏嚢活性肽的报道不多。禽流感病毒（AIV）属于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3个型。其中甲型流感病毒多发于禽类，感染后引起各种综合症，从无临床症状感染到呼吸道疾病和产蛋下降，到死亡率接近100%的严重全身性疾病。高致病性禽流感（HPAI）为一类传染病，可表现为急性败血性，呼吸困难，腹泻，高热，神经症状等，给养殖业造成重大的经济损失。 本项目以法氏囊提取物为材料，进行分离纯化，获得一种法氏囊四肽。然后与与禽流感灭活疫苗一起免疫小鼠，检测小鼠抗体、T细胞亚型、树突状细胞分子、淋巴细胞活力等实验，通过抗体反应、细胞免疫反应、抗原递呈功能等，以此研究该分离的法氏囊多肽对禽流感疫苗免疫反应的调节作用，从而为禽流感疫苗的佐剂改进及疫情防控提供参考依据，为禽流感疫苗的进一步临床应用提供实验依据。临床应用研究发现，法氏囊组织灭活疫苗无论对法氏囊病毒超强毒还是变异株的免疫保护效果都是最好的，远超过其它法氏囊细胞苗、鸡胚苗。猪瘟脾淋苗的保护效果远远高于猪瘟细胞苗，脾脏转移因子有明显的免疫增强效果，市场很火，这些说明禽类和哺乳动物的免疫器宫中存在共同的促进免疫反应的活性分子。目前，临床上主要依靠疫苗进行疫病预防。研究体液免疫系统中、促进疫苗整体免疫效果的活性分子对当前临床疫病防治具有重要意义。
目前，研究人员已经对人类身体健康密切相关的多种活性分子展开了广泛的研究，中枢免疫器官是机体及其重要的免疫系统，对人类健康发挥关键作用。法氏囊是目前世界上唯一一个公认的中枢体液免疫器官。法氏囊活性肽的研究虽然取得了一定的进展，但目前对法氏囊活性肽的认识还远远不足，关于它们的生物学特性及功能等方面还有很多不清楚地地方，特别是对法氏囊活性肽的作用机制研究几乎是空白，需要深入研究。由于法氏囊重要的免疫调节活性以及法氏囊提取物具有广泛的生物学活性。所以，法氏囊中活性物质的研究具有非常广阔的领域和实际应用的广泛意义。胸腺激素在疾病诊断和治疗中有着重要的作用，现己广泛应用于乙肝、丙肝、肿瘤、癌症的临床治疗和免疫缺陷等的研究中。而对于与胸腺具有相同地位的法氏囊活性肽的功能及作用机理的深入研究和不断的临床和实际应用方面的试验，不久的将来，一些法氏囊活性肽会同胸腺素一样广泛应用于临床医学和生产实践。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标及内容：通过将法氏囊为材料进行分离纯化，获得一种法氏囊四肽，与禽流感灭活疫苗一起作用于小鼠，检测小鼠抗体、T细胞亚型、树突状细胞分子、淋巴细胞活力等，进行免疫调节活性初步鉴定，从而达到研究该法氏囊四肽对疫苗免疫反应的调节作用的目标。
拟解决的关键问题：法氏囊四肽分离及免疫调节活性初步鉴定
3. 研究的方法与方案
研究方法：本项目以法氏囊提取物为材料，进行分离纯化，获得一种法氏囊四肽。然后与与禽流感灭活疫苗一起免疫小鼠，检测小鼠抗体、T细胞亚型、树突状细胞分子、淋巴细胞活力等实验，通过抗体反应、细胞免疫反应、抗原递呈功能等，以此研究该分离的法氏囊多肽对禽流感疫苗免疫反应的调节作用，从而为禽流感疫苗的佐剂改进及疫情防控提供参考依据，为禽流感疫苗的进一步临床应用提供实验依据。小鼠抗体的检测可采取血凝抑制实验（HI），血清效价的测定按照OIE推荐方法进行。细胞因子的检测可应用商品化鸡细胞因子试剂盒（ＲD，USA）检测IL－4和IFN－γ的含量 。采用台盼蓝染色法对淋巴细胞染色后将其进行吸光度的测定从而达到检测淋巴细胞活性的目的。
技术路线：小鼠抗体的检测：法氏囊四肽分别与AIV灭活抗原和疫苗混匀，免疫小鼠两次，分别于免疫后第14天和第28天采集试验小鼠的血清进行HI抗体检测 。
血清细胞因子检测：可于二免后第7d，采集试验小鼠全血，分离血清，采用细胞因子ELISA检测试剂盒检测IFN－γ和IL－4以评估法氏囊四肽对细胞因子的影响。
4. 研究创新点
新分离纯化得到一种法氏囊四肽，与禽流感疫苗共同作用于小鼠，以此研究该分离的法氏囊多肽对禽流感疫苗免疫反应的调节作用，从而为禽流感疫苗的佐剂改进及疫情防控提供参考依据。
5. 研究计划与进展
2020年3月20日-3月25日完成开题报告
2020年4月1日-4月3日进行实验前期准备，提取法氏囊多肽或者由公司合成，训练必要的实验技术
2020年4月4日开始第一次免疫
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