1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
猪瘟(Classic Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(CSF Virus,CSFV)引起的一种对猪危害极大的高致死性、烈性传染病,临床主要特征为稽留热,皮肤和黏膜出现大量出血点、实质器官出血、坏死、梗死等败血性变化[1]。自1833年发现以来,该病对全球养猪业造成的经济损失十分重大。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物传染病,我国将其列为一类动物疫病,并在《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中将其列为优先防控的重大动物疫病之一。根据OIE最新数据,截至2019年5月,已有三十六个国家成功实现猪瘟的净化,而包括中国在内的多数国家,猪瘟的流行形势仍严峻[2]。
自2007年我国实行猪瘟全面强制免疫后,猪瘟逐渐得到有效控制,无论是疫情发生次数还是暴发规模都明显缩减[3]。与此同时,近年来我国猪瘟的流行特点、临床表现与病理变化也日益复杂,流行趋势从频发的大流行转变为点状散发性流行,临床症状和病理变化由典型转变为非典型,亚临床感染、隐性感染、持续感染和免疫耐受普遍存在,根除猪瘟仍是一项巨大挑战[4,5]。猪瘟没有有效的治疗手段,以免疫接种为主的综合防治措施是唯一可行的猪瘟防控和净化方法。研究表明,我国推广使用的猪瘟兔化疫苗(C株)仍然能够对国内猪瘟流行毒株提供有效保护,同时 C株疫苗对基因 3 型也具有坚强的保护力[6]。然而由于母源抗体干扰、疫苗质量差异、免疫程序不合理、其他病原的免疫抑制作用、猪只营养与健康状态不佳等因素,猪瘟免疫失败现象时有发生。CSFV抗体检测虽然难以鉴别野毒感染和兔化弱毒,但作为评估群体免疫状态的重要手段,定期进行准确有效的抗体水平监测十分必要。根据监测结果,兽医可及时调整免疫计划,确保畜群对病原具有足够的抵抗力,或是依据接种效果评估疫苗质量,还能对亚临床感染、慢性感染的猪只进行筛查;动物卫生监管部门则能够实时掌握猪瘟流行情况,发现传播风险因素,有助于动物防疫工作的有序开展以及为养殖从业者提供详实可靠的指导性信息。
CSFV抗体检测技术有很多,目前国内外常用的包括中和试验、荧光抗体试验、正向间接血凝试验、酶联免疫吸附测定、胶体金免疫分析,一些新型抗体检测方法如化学发光酶联免疫吸附测定、表面等离子共振、磁致弹性传感器也陆续得到发展和应用[8,9,10]。其中过氧化物酶中和试验、荧光抗体中和试验、ELISA均为OIE指定的国际贸易筛检试验[7],间接ELISA、阻断ELISA和正向间接血凝试验为我国2013-2019年《国家动物疫病监测与流行病学调查计划》规定的血清学检测方法和免疫合格判定方法。这些方法各具特点,有优势,也有缺陷,因此在进行CSFV抗体检测时需要根据实际情况确定最适宜的一种[11,12,13]。本文将对这些方法做出详尽的介绍,并在检测性能、成本、应用范围等方面进行对比分析,以便为各级兽医部门选择或建立合适的抗体检测方法提供参考。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
CSFV抗体检测技术有很多,目前国内外常用的包括中和试验、荧光抗体试验、正向间接血凝试验、酶联免疫吸附测定、胶体金免疫分析。同时,一些新型方法也陆续出现,如表面离子共振、磁弹性传感器、化学发光酶联免疫吸附测定等。不同方法在检测性能上存在差异,各有侧重,优势与缺陷不一,这给使用者在选择时增添了困扰,使用者需要充分了解和掌握不同方法的特性才能做出最适宜的选择。本文将对各种CSFV抗体检测技术做出详尽的介绍,并在检测性能、成本、应用范围等方面进行对比分析,以便为各级兽医部门选择或建立合适的抗体检测方法提供参考。另外,在本文所涉及的方法的基础上,提出一种猪瘟唾液抗体化学发光磁酶免疫分析方法,并对此方法的可行性加以论述。
2.研究内容
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法、技术路线、实验方案
(1)文献检索
本研究拟在中国知网、万方数据库和PubMed等数据库检索近年来已建立的各种猪瘟病毒抗体检测方法,包括病毒中和试验、间接血凝试验、胶体金免疫分析、酶联免疫吸附剂测定等,以及不同方法之间的对比性试验。中文检索关键词为“猪瘟病毒”、“抗体检测”,英文检索关键词为“ CSFV”,“antibody detection”。
4. 研究创新点
1.对现有猪瘟病毒抗体检测方法的原理、特点做出详尽的介绍。
2.对比各类猪瘟病毒抗体检测方法在特异性与敏感性、检测成本、检测速度、应用范围等方面的差异,并将对比结果以更直观的评分表的形式列出,便于各级兽医部门选择或建立合适的抗体检测方法。
5. 研究计划与进展
第一阶段(2020.02.17-2020.03.13) 在线检索文献,收集相关资料、数据。
第二阶段(2020.03.14-2020.03.30) 撰写论文大纲和开题报告。
第三阶段(2020.03.31-2020.04.15) 对猪瘟病原学、流行病学和流行现状、诊断方法、防控方案等进行调查,完成论文的前言和综述部分。
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