1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
流行性感冒病毒（Influenza virus）根据核蛋白和机制蛋白的抗原性不同分为甲、乙、丙、丁四型，其中甲型流感病毒（Influenza A virus，IAV）在人与猪之间或禽类与猪之间的传播已使其在猪群中出现了几个自主循环的谱系，其在全世界家猪群体中广泛传播，由于IAV可引起急性呼吸道疾病，且临床上会出现病毒和细菌混合感染的现象，进一步加剧患病动物的临床症状，对畜牧业产生巨大的经济损失[1][2][3]。丙型流感病毒（Influenza C virus，ICV）首先在人和猪中被发现，最近也在牛群中发现。已有研究提示ICV在人群与猪群间存在种间传播，其跨宿主传播能力以及更广的宿主范围使其对畜牧业和公共卫生的潜在威胁可能超出我们的预期[4]。丁型流感病毒（Influenza D virus，IDV）首先在猪群中发现，后续研究认为牛是其天然宿主[5]。并且有报道在牛场工人体内检测到IDV血清学阳性[6]。同时IDV能够在雪貂和豚鼠之间复制和传播，而雪貂是人类流感病毒感染的模型[7]。值得注意的是IDV表现出比ICV更广泛的细胞和宿主趋向，并其内部基因存在不断重配[5]。这些研究表明其拥有跨宿主传播和成为人畜共患病的潜力。
如今研究者们开发出多种可以对病毒性传染病进行临床检测的核酸检测技术，其中聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法被广泛应用，相较于其他检测方法，它更为快速和准确，在临床检测方面具有极大的优势。而荧光定量PCR(real-timepolymerase chainreaction,real-time PCR)检测方法，在检测的灵敏性、特异性等方面，又全面优于常规的PCR检测方法[8]。一般而言，对于常规的PCR检测方法，其针对单一病原的单重检测通常费时费力，针对多种病原同时检测的多重检测又会导致灵敏度较低。而单重的荧光定量检测方法虽然不需要额外的终点分析，但在实际操作过程中并不能从根本上提高检测的效率，而多重荧光定量检测方法，不仅能够保证接近单重荧光定量检测时的高特异性和灵敏度，并且能根本上提升检测工作的效率。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究的目标
成功构建ICV和IDV双重荧光定量PCR检测方法。收集我国部分地区存在呼吸道和消化道症状猪群病料，提取病毒基因组核酸并进行荧光定量PCR检测。
2.研究的内容
3. 研究的方法与方案
1.研究方法
通过分析ICV和IDV的全基因序列，在序列保守区设计特异性引物及探针，并使用两种病毒的质粒标准品对检测方法的灵敏性、特异性和稳定性进行验证和评估，建立一种高效、准确的检测方法。
2.技术路线
4. 研究创新点
特色或创新之处
1.丁型流感病毒为近年来新发的流感病毒亚型，目前国内外针对丙型流感和新发丁型流感的监测和研究仍然较少，对于两种病毒在猪群中的流行分布情况尚不明晰，所以建立一种高效的检测技术具有实用价值和研究意义；
2.多重荧光定量PCR检测方法是一种高效、灵敏和准确的临床病原核酸检测方法，目前尚无针对丙型流感和新发丁型流感的双重荧光定量PCR检测方法。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
（1）2019.11-2019.12：根据ICV和IDV基因序列设计特异性引物和探针并合成，成功构建ICV和IDV目的基因重组质粒标准品，以及建立荧光定量PCR标准曲线；
（2）2019.12-2020.1：验证所建立双重荧光定量检测方法的灵敏性、特异性、稳定性以及共感染模型检测。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
