1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题意义禽流感(AI)是A型流感病毒(AIV)引起的禽类全身性或呼吸器官性传染病,主要侵害鸡、火鸡、鸭和鹅等[1]。
我国《家畜家禽防疫条例》和国际兽疫局动物流行病组织(OIE)规定该病为A类烈性传染病。
该病的毒型众多、变异性极强、低致病性毒株能在短期内变成高致病性毒株(HPAIV),从而给养禽业带来毁灭性打击[2]。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标实时监测种禽场禽类感染禽流感的状况,及时对各亚型禽流感进行分离鉴定,以期对种禽场禽流感的防治提供参考。
2. 研究内容2.1 对种禽场已检测出M阳性样品接胚,进行病毒分离。
2.2 对尿囊液检测M基因、亚型鉴定以及HA基因鉴定。
3. 研究的方法与方案
4.1 研究方法4.1.1 鸡胚接种棉拭子样经充分拈动、拧干,然后除去拭子,样品液全12000r/min离心10分钟,取上清液400μL,按1:100加入双抗,混匀作为接种材料。
9-11日龄SPF鸡胚由南京农业大学免疫研究所提供,每个样品接两枚鸡胚,每枚经尿囊腔途径接种100μL,置于37℃孵育3天,每12小时观察鸡胚活性,弃去24小时内死亡的胚,无菌收集72小时尿囊液,并检查其对红细胞的凝集活性,测定血凝滴度。
4.1.2 病毒鉴定红细胞凝集(HA)试验:将上述每代鸡胚尿囊液分别采用微量法或全量法按常规进行血凝价测定。
4. 研究创新点
及时检测种禽场禽流感的感染情况,从而对禽流感的流行进行监测。
加强对流行毒株的防治,既降低了高致病性禽流感的突发性可能,同时也降低养殖业的损失。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016.09.01-2016.09.30 学习实验室基本操作技术,阅读文献,丰富相关知识;2016.10.01-2016.12.30 每周检测种禽场病料样本,并进行记录;2017.01.01-2016.01.10 整理汇总种禽场流感病毒检测结果,分析流行病学情况;2017.03.01-2017.05.30 撰写论文。
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