1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
副粘病毒科、副黏病毒亚科呼吸道病毒属的成员包括人副流感病毒3型（HPIV3）、人副流感病毒1型（HPIV1）、牛副流感病毒3型（BPIV3）和仙台病毒（SeV）[1]。其中BPIV3是引起犊牛肺炎的主要病原之一。犊牛肺炎是一种临床常见疾病，每年均造成养牛业的巨大经济损失[2]。目前，BPIV3感染已呈世界性分布，且感染率很高[3]。2013年下半年起，江苏、安徽多地山
羊养殖场3～8月龄育肥山羊陆续出现以呼吸道症状为主的疾病，发病率和死亡率较高，药物治疗效果较差。通过对病料的病原学分析和病毒分离，鉴定出1株新型副流感病毒3型（PIV3）毒株，并将其命名为JS2013株[4]。这是世界上
首次报道该病毒在山羊中的存在。目前，国外并无相关研究，国内对此研究也尚处于基础阶段。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
本实验以pET32a( )为表达载体，在大肠杆菌中大量表达CPIV3JS2013株的N蛋白，并以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA检测方法，可为临床提供快速有效的检测方法，并为今后的单克隆抗体制备奠定基础。
2.研究内容
3. 研究的方法与方案
1.研究方法
（1）参照TRIzol试剂操作说明书提取JS2013株病毒的总RNA。参照GenBank中已发表的BPIV3全基因组序列设计合成扩增N基因的上游引物F和下游引物R，采用RT-PCR法，以病毒RNA为模板扩增目的基因。对PCR产物进行凝胶电泳检测，并按照琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作说明书进行纯化。
（2）将回收的PCR产物与载体pET32a( )酶切回收后连接，所得连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，并用涂布棒涂布到含Amp抗性的LB平板上，37℃培养箱过夜培养至出现适当大小的单菌落。挑取单菌落至LB培养基中培养过夜后提取质粒。将菌液PCR与质粒酶切鉴定均为阳性的克隆进行测序。
（3）将重组质粒pET32a( )-N转化大肠杆菌BL21细胞并进行诱导表达，纯化重组蛋白，并采用Western-blot方法进行鉴定。
4. 研究创新点
采用原核表达系统大量制备病毒N蛋白，N蛋白是常用于该类病毒抗体检测的抗原，建立的ELISA方法将有望替代HI用于大量临床样品的检测。
5. 研究计划与进展
1.研究计划
（1）2015.9.1～2015.10.15
对实验涉及的相关理论知识及实验操作方法进行学习；提交毕业论文开题报告；N蛋白目的基因的扩增及表达载体pET-32a( )-N的构建。
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