1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
犬细小病毒病是由细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)的犬细小病毒(Canine parvo-virus, CPV)感染幼犬引起的一种急性传染病,以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少以及心肌炎为主要特征,发病率高,传染性强,死亡率高,是危害我国养犬业最为严重的传染病之一,可造成严重的经济损失。
犬细小病毒的发现只有30年的时间,但该病毒对犬的感染危害严重,世界各国对该病毒生物学特性及其疫病的防制进行了大量的研究工作。
由于很多疾病都会引起犬的呕吐、腹泻,所以通过临床观察很难确诊CPV感染,目前已经建立的检测方法有很多种,如电镜、病毒分离(VI)、乳胶凝集试验、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、原位杂交、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)等[1]。
2. 研究的基本内容和问题
本研究主要着手于以江苏省农科院兽医研究所自己制备的犬细小病毒单克隆抗体为主要材料来制作能够特异性地检测犬细小病毒的胶体金试纸;研究过程中需要解决的问题有需要找出制备胶体金试纸的各试剂的最适浓度,以保证胶体金试纸的检测结果(即T线)的显示清晰准确。
3. 研究的方法与方案
首先采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,接着用制备好的胶体金溶液来确定标记抗体的最适宜pH值以及最适宜的蛋白浓度,确定好以后进行胶体金的标记,获得胶体金标记好的单克隆抗体(金标抗体),随后进行胶体金免疫层析试纸条的制备和组装,获得组装好的试纸条以后需进行检验,主要检测试纸条的特异性、敏感性、实用性、重复性、稳定性等会对试纸条的使用及检测结果造成影响的几大要素。
4. 研究创新点
特色:本实验中使用的犬细小单克隆抗体是实验室所在的江苏省农科院兽医研究所自己制备的单克隆抗体。
5. 研究计划与进展
2015年9月~2015年10月 查阅资料及实验开展前准备2015年10月~2015年12月开展实验预期获得确定建立犬细小病毒单克隆抗体免疫胶体金检测试纸条的适宜条件,为进一步研究该试纸条奠下基础。
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