1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1. 大枣多糖的概况：
大枣(Fructus jujubae)为鼠李科植物枣(Ziziphus jujube Mill)的干燥成熟果实，其味甘性平，归脾、胃、心经，具有补中益气，养血安神，缓和药性的功能，主治脾胃虚弱、内伤肝脾、营血耗伤，是补脾胃常用药。此外，大枣与部分药性峻烈或有毒的药物配伍可以调和药性，或缓和其毒性、烈性，因此也是常用的减毒药[1]。
化学研究表明，大枣中含三萜苷元、皂苷、生物碱、黄酮及黄酮苷、多糖、蛋白质、维生素、有机酸等成分[2]。据分析，大枣中含有较多的糖分，其中100g鲜枣含有碳水化合物23.2g，而100g干枣含有碳水化合物50.3~80.69g[3]。大枣中功效成分主要有大枣环核苷酸、大枣三帖酸、大枣多酚、大枣多糖、低聚糖等[4]，其中，大枣多糖的主要组成大多数为水溶性的中性多糖(JDP-N)和酸性多糖(JDP-A)，其分子量分别为63000Da和263000Da，而根据组成多糖的单糖进行研究的结果则表明，大枣中性多糖由L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖组成；酸性多糖的单糖组成则为L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖，D-甘露糖和D-半乳糖醛酸[5]。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标
1.1 以超声时间、超声功率、料液比、提取温度、提取时间五个因素为对象，考察超声辅助提取大枣多糖的提取效果。各影响因素进行单因素分组实验，得到各设定条件下的多糖提取率。
1.2 通过正交试验设计优化单因素考察结果得到最佳提取条件。
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法与实验方案
1.1 材料与试剂
大枣 葡萄糖 95%乙醇及无水乙醇 浓硫酸 5%苯酚
1.2仪器与设备
冷凝装置 台式真空干燥箱 搅拌器 离心机 数控超声波清洗器 电热恒温水浴锅 电子分析天平 可见分光光度计 40目筛 冷冻干燥机
1.3 实验方法
1.3.1多糖的提取
大枣去核后放置于干燥箱中60℃烘干至恒重，经粉碎后过40目筛获得大枣干粉，95%乙醇脱脂后于恒温箱中干燥。每次称取10.0g样品，按照设计好的提取条件进行提取。提取结束后，5000r/min离心10min得到上清液，上清液加入3倍体积无水乙醇沉淀过夜，5000r/min离心15min得到多糖沉淀，冷冻干燥后获得粗多糖沉淀。
以超声时间、超声功率、料液比、提取温度、提取时间五个因素设计超声提取法的单因素试验（表1）。
表1.超声提取法单因素条件设定
影响因素 | 条件设定 | |||||||||
超声时间（min） | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | ||||
超声功率（W） | 50 | 70 | 90 | 110 | 130 | 150 | ||||
料液比 | 1：10 | 1：15 | 1：20 | 1：25 | 1：30 | |||||
提取温度（℃） | 70 | 75 | 80 | 85 | 90 | 95 | ||||
提取时间（h） | 0.5 | 1 | 1.5 | 2 | 2.5 | 3 | ||||
1.3.2 正交试验设计对超声波辅助提取大枣多糖条件进行优化 综合单因素实验结果，通过正交试验设计优化得到最佳提取条件，为进一步研究大枣多糖的提取方法和工艺提供基础。
1.3.3 多糖含量的测定 苯酚-硫酸法
1.3.3.1 标准曲线的制备 称取0.250g葡萄糖，用蒸馏水定容至250ml，得到1mg/ml的标准葡萄糖溶液，精确量取此溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml于100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。精密量取上述各浓度标准溶液2.0ml于15ml长试管中，加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，再精密加入浓硫酸5.0ml，摇匀。放置5min，置90℃水浴加热15min，取出，室温放冷，以相应试剂为空白，490nm处依次测定吸光度，以标准品-蒸馏水吸光值为纵坐标，以葡萄糖标准品浓度为横坐标，制作标准曲线。
1.3.3.2 样品溶液的制备 称取0.25g待测样品，用蒸馏水定容至250ml，得到1mg/ml的样品液，取1ml样品溶液于10ml容量瓶中定容至刻度，再取1ml于试管中，加水至2ml，按标准曲线制备进行操作，由回归方程计算出待测品的浓度。
1.3.3.3 换算因子 称取粗多糖10mg定容至250ml得到0.04mg/ml的溶液，取2.0ml于试管中，按标准曲线制备进行操作，从回归方程中得到多糖的浓度，按F=W/C计算，其中W为实际多糖质量，C为测得多糖溶液中葡萄糖的质量。
1.3.4 多糖的提取率
多糖的提取率（%）=（Cs*D*V*F）/W*100%
其中，Cs为供试品溶液中多糖的质量浓度，D为供试品溶液的稀释倍数，V为供试品溶液的体积，F为换算因子，W为样品质量。
2. 技术路线
2.1用超声波辅助提取大枣粗多糖
2.2苯酚-硫酸法分别测定多糖含量
2.3分别计算多糖提取率
2.4用正交试验设计优化工艺条件
3. 可行性分析
本实验基于已有的文献可查，资料较为丰富，便于解决在操作中不确定的问题，另外通过与老师交流，已确定实验室已有材料或设备足够支撑实验的进行，由于提取时间较为长久，只要经过合理安排可以保证顺利结束。
4. 研究创新点
近年来研究大枣多糖相应提取方法的工艺条件较多，本课题在前人基础上对超声波法提取大枣多糖的单因素条件进行进一步细化，为进一步条件优化和工艺生产条件打好基础。
5. 研究计划与进展
本实验工作量大小适中，难度一般，时间初步定为2015.9~2015.12
2015年9月 资料查阅，与导师讨论实验的可行性，申报课题及撰写开题报告
2015年10月-2015年12月底 超声提取大枣粗多糖并测定多糖含量，进行正交设计优化
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