1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述介绍长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs),特别是ω-3类脂肪酸,包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),对人体健康至关重要,对神经系统和心血管系统疾病有良好的预防效果。
由于其特异的生理学功能,广泛应用于食品、工业、医疗等各个领域。
二十碳五烯酸(EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸,包含20个碳和5个双骨架。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
研究或解决的问题(1)构建PUFA合成酶途径相关基因表达质粒并表达(2)在大肠杆菌中构建能合成PUFA的途径(3)优化工程菌株的生长状态研究手段由综述可知,PKS途径被认为是主要用来合成PUFAs的途径,将PKS基因簇导入大肠杆菌中表达。
目的基因(1)希瓦氏菌(Shewanella sp. MR-1)的PKS基因簇可分离出四个阅读框(ORF A-D)(2)裂殖藻(Schizochytriwum sp. HX-308)的PKS基因簇可分离出三个阅读框(ORF A-C)(3)Moritella marina MP-1中分离的磷酸腺苷基转移酶(PPTase)基因设计引物(PfaA-D primers),通过PCR扩增得到目的基因片段质粒构建用限制性内切酶((NotI、XhoI、EcoRI、NdeI)从PRC扩增的片段切取同源片段,克隆到载体pETDueT(两个多克隆位点)中。
转化pETDueT质粒转化到大肠杆菌中表达,LB 培养基(氨苄)用于大肠杆菌培养及转化子筛选。
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