1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
番茄褪绿病毒（Tomatochlorosisvirus，ToCV）常侵染番茄，发病番茄常出现下部叶片黄化、脉间褪绿、边缘轻微卷曲，叶片光合作用显著降低，果实变小，产量和品质明显下降的症状，给番茄生产造成严重损失。TOCV引起的叶片褪绿黄化症状类似于植株缺素症状，导致在病害调查中不易对其发生进行正确判断。虽然ToCV引起的褪绿黄化病不导致绝产，但其引起的损失多在30%~40%，减产明显。
ToCV属于长线形病毒科（Closteroviridae）毛形病毒属（Crinivirus）成员，基因组为二分体正义单链RNA，总长15.3~16kb，编码多种病毒蛋白，其中RNA1上主要编码复制相关蛋白（RNA-dependentRNApolymerase，RdRp），RNA2上主要编码病毒衣壳蛋白(CapsidProtein，CP)。该病毒不能通过机械摩擦传毒，只能依靠媒介昆虫粉虱传播。传播ToCV的媒介昆虫如烟粉虱等寄主范围十分广泛，可以在不同病毒植株和健康植株之间扩散，加快了该病毒的蔓延危害。ToCV传播迅速，成为我国番茄生产中又一重要病毒，防控形势严峻。
番茄褪绿病毒最早于1998年在美国佛罗里达州发现(WislerGCetal．1998)，随后在世界多地陆续报道。我国对于该病毒，首先于2004年在台湾报道(TsaiWSetal．2004)，2013年赵汝娜等人在北京先后在番茄(ZhaoRNetal.2013)和辣椒(ZhaoRNetal.2014)上分别发现并鉴定了该病毒。随后赵黎明等人又在山东检测到了该病毒，首次明确山东地区番茄受到番茄褪绿病毒的侵染（Zhaoetal.，2014）。同年，他们又检测到山东设施地区番茄受到番茄褪绿病毒及番茄黄化曲叶病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV）两种病毒的复合侵染（Zhaoetal.，2014），表明番茄褪绿病毒可与其他病毒协同作用造成复合侵染，而番茄黄化曲叶病毒则属于双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus），于2005年传入我国（Wuetal.，2006），并由点到面快速传播，是当前保护地番茄生产上首要病害，明确我国保护地番茄是否遭受番茄褪绿病毒与番茄黄化曲叶病毒的复合侵染至关重要，可为这两种病毒的综合防治提供预警。目前，我国对番茄褪绿病毒的研究尚处在开始阶段，对番茄褪绿病毒与番茄黄化曲叶病毒的协同传播机制及其协生作用了解甚少，今后需要进一步的深入研究，这两种同为烟粉虱传播的病毒的复合侵染对番茄生产的潜在威胁应引起足够的重视。而且虽然国外已经对ToCV有较多研究和报道，在我国部分地区也开始陆续有报道，但是ToCV作为最近被发现的一种新病毒，其在我国的发生和危害情况需要开展更为详细的调查和研究。最后国内针对该病毒的诊断主要通过症状观察，结合RT-PCR等分子生物学方法，血清学检测技术尚未应用(GaoLLetal.2015)，对于同样具有灵敏度高、特异性强、操作简单等优点的血清学检测技术的发展势在必行。
2. 研究的基本内容和问题
我们从山东寿光某保护地蔬菜产区的不同大棚内共采集包括番茄、辣椒、白菜在内的20份样品，带回实验室进行鉴定，主要研究以下几点：
1、鉴定这批样品所感染的病害是否为ToCV；
2、鉴定这批样品中，同一植物上是否发生ToCV和其他病毒的复合侵染；
3. 研究的方法与方案
研究的思路与方法如下：
1、用Trizol法分别提取20份包括大部分番茄和部分辣椒、白菜、萝卜样品的总RNA，用ToCVCP的一对特异性引物ToCV-F、ToCV-R中的下游引物ToCV-R反转录成cDNA，以cDNA为模板，用ToCV-F、ToCV-R引物进行特异性扩增，PCR产物在1%琼脂糖凝胶上跑胶后，如果扩出大小为775bp的条带，割胶纯化回收条带，直接送往南京金斯瑞生物科技有限公司测序，扩增的产物经测序后利用ncbi与在GenBank中已经登录的ToCV的序列进行比对分析，以此检测样品中是否感染ToCV。
2、对于用特异性引物p1773、p1774未检测出感染ToCV的样品，我们可以用在番茄上常见的其他病毒的特异性引物进行RT-PCR，或是通过提取病毒的双链RNA，进行鉴定。
4. 研究创新点
本课题相较于之前的研究而言，它的特色或创新之处在于：
1、研究除了番茄黄化曲叶病毒之外，番茄褪绿病毒是否还能与其他的病毒发生复合侵染，进行为害。
2、在鉴定病毒的基础上，制备相应的抗体，用于日后的ELISA等血清学鉴定。
5. 研究计划与进展
2015年11月-2016年01月病毒种类的鉴定
2015年01月-2016年02月已鉴定病毒载体的构建
2016年02月-2016年04月对于构建好的载体进行原核表达，制备抗体
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