1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1、课题意义：
黄萎病是影响棉花产量和品质的主要病害，但是棉花抗黄萎病分子机理的研究进展缓慢。番茄抗黄萎病的Ve1是目前唯一的植物抗黄萎病主效基因，Ve1信号级联的下游一部分与MAPK信号通路连接。且研究者从海岛棉中克隆了与Ve1具有较高同源性的类受体蛋白基因，过量表达该基因可以提高拟南芥和陆地棉对落叶型和非落叶型黄萎病菌的抗性。因此，蛋白质的磷酸化和脱磷酸化可能在棉花黄萎病信号通路中起到关键的作用。
本研究一种能方便检测大丽轮枝菌侵染程度和进程的技术体系，采用固定化金属离子亲和层析（IMAC）分离纯化技术和iTRAQ定量定性分析技术，检测黄萎病病菌侵染过程中棉花磷酸化蛋白质组的变化，解析棉花抗黄萎病关键信号通路，为进一步研究棉花黄萎病抗性的分子机制奠定基础。
2. 研究的基本内容和问题
1、研究目标
（1）建立实时跟踪检测大丽轮枝菌侵染棉花的程度和过程的实验技术体系。
（2）鉴定棉花抗黄萎病相关的磷酸化蛋白质
3. 研究的方法与方案
1、研究方法
（1）转GFP的大丽轮枝菌菌系的获得。将含有真菌启动子驱动的GFP基因、潮霉素B抗性基因质粒载体转化到农杆菌LBA4404菌株，再分别与落叶型黄萎病菌株V991和非落叶型中等致病力菌株BP2共培育，获得转基因大丽轮枝菌。筛选培养特性、菌落表型、致病力等与其原始野生型表现一致的转基因菌株作为进一步试验用的病原菌。
（2）接种菌液、获得侵染棉花幼苗。用浸根法将转GFP基因的大丽轮枝菌菌株接种培育棉花幼苗。选择各个处理内生长势、表现型、菌丝生长一致的棉花幼苗，作为磷酸化研究的植物材料。
4. 研究创新点
根据棉花抗黄萎病分子机制研究取得的最新进展，率先从分析磷酸化蛋白质组的角度研究棉花抗黄萎病关键的信号通道。为棉花黄萎病抗性的分子机制研究提供新的途径。
5. 研究计划与进展
1)2015.6-2015.7：将GFP基因导入V991和BP2中
2)2015.7-2015.8：对转基因V911和BP2进行性状和致病力鉴定
3)2015.9-2015.11：不同棉花品种磷酸化蛋白质的提取、酶切、磷酸肽富集与纯化。
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