1. 研究目的与意义
内容： 在30只BALB/c小鼠右侧背部皮下接种4x105 MC-38细胞，定期观察肿瘤生长情况，待肿瘤生长至体积80~100mm3时根据肿瘤的大小和小鼠体重随机分成3组，对照组10只、给药组10只、联合给药组10只，分组后的剩余老鼠安乐死。然后按方案进行实验，根据实验数据分析Anti-PD-1对小鼠结肠癌的抗肿瘤作用。
意义：评价测试药物PD-1在小鼠结肠癌MC-38细胞株异种移植小鼠动物模型中的抗肿瘤作用，为研制该抗体药物应用于临床提供参考。
2. 文献综述
PD-1对结肠癌的表达的研究进展
摘要：结肠癌作为一种临床常见的恶性肿瘤，严重影响人们的健康，占胃肠道肿瘤的第三位，而且呈逐年上升趋势［1］。目前，结肠癌的主要治疗手段为外科手术治疗、 化疗等［2］。然而化疗药物存在对癌细胞缺乏选择性、药物毒副作用大、治疗后耐药等不足。现在，单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性，在结肠癌的治疗中有很好的应用前景［3］。PD-1在T细胞的信号转导中发挥着关键性作用, 能够通过阻断与PD-1受体与PD-L1配体-信号通路, 促进T淋巴细胞的增殖和分化, 从而激活抗肿瘤免疫反应。本文主要对PD-1抗体的研究，以及该抗体在结肠癌发生发展中的表达作一综述。
3. 设计方案和技术路线
实验设计：每组的动物数及详细的给药途径、剂量和方案见下表
表1 MC-38动物模型中的给药途径、剂量及方案
组别 | N | 给药组 | 剂量 (mg/kg) | 给药体积（ul/g） | 给药方式 | 给药时间 |
1 | 10 | PBS | 10 ul/g | i.p. | TIW*3weeks | |
2 | 10 | anti-PD-1 | 10 | 10 ul/g | i.p. | TIW*3weeks |
3 | 10 | PBS | 10 ul/g | i.p | TIW*3weeks | |
anti-PD-1 | 10 | 10 ul/g | i.p. | TIW*3weeks |
注：N：动物只数；
PBS：溶媒对照（0.5%MC）；
i.p：腹腔注射给药；
TIW：一周三次（第1、3、5天每周）
实验材料：
实验细胞种类：小鼠结肠癌细胞株MC-38，
实验动物：BALB/c小鼠，由灵畅提供。性别为雌性，接种细胞时预计小鼠体重范围为18-22g/只
实验试剂：PBS（0.5%MC）；anti-PD-1
实验动物模型的建立：
接种细胞浓度：4x105个/只
接种体积：0.1ml/只
接种部位：右下外侧
随机分组：
在给药开始前，称量所有动物的体重，并用游标卡尺测量肿瘤体积。鉴于肿瘤体积会影响治疗的有效性，所以用随机分组设计的方法，。
给药：分组当天按照实验设计（表1）开始给药。
实验观察：
肿瘤细胞接种后，常规监测肿瘤生长情况，实验动物异常行为情况，体重增加或降低情况，摄食和饮水情况，被毛及其它异常情况。试验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。
数据收集：
开始给药后，每周测量3次小鼠的体重，测量2次肿瘤的大小。肿瘤大小计算公式：肿瘤体积（mm3）= 0.5 （肿瘤长径 肿瘤短径2）。
4. 工作计划
2022年2.22~2.26 查阅文献，明确结肠癌的现状以及治疗手段
2022年2.27~3.12 根据查阅的文献和指导老师的指导，完成开题报告并制定实验方案
2022年3.12~4.27 根据实验方案进行课题实验
5. 难点与创新点
PD-1作为抑制性受体,在T细胞的信号转导中发挥着关键性作用, 能够通过阻断PD-1受体与PD-L1配体-信号通路, 促进T淋巴细胞的增殖和分化, 从而激活抗肿瘤免疫反应目前，已有多项早期的临床研究提示，PD-1抗体治疗肿瘤的疗效显著且不良反应小，测试PD-1抗体对小鼠结肠癌的药效为以后该药应用于临床癌症的治疗奠定基础。
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