1. 研究目的与意义
内容： 梭菌C1-6大豆素还原酶（DZNR）基因的克隆与表达意义： 雌马酚作为大豆异黄酮在人体肠道中的最终代谢产物其生物学活性较前体更强。
众多研究表明大豆异黄酮具有广泛的应用价值，包括抗氧化、抗溶血和抗真菌活性，及防治乳腺癌、骨质疏松、心血管疾病、子宫内膜癌和前列腺癌等，因此雌马酚的生物学功能受到广泛关注, 成为目前研究的一个热点。
大豆异黄酮在特定的肠道菌作用下降解产生雌马酚，人群中约有30 %～50 %的人能将大豆异黄酮转化成雌马酚进而在体内循环和排泄，但影响其转化的因素目前尚不完全清楚,其中肠道菌群可能是最重要的因素。
2. 文献综述
梭菌C1-6大豆素还原酶（DZNR）基因的克隆与表达 李欢欢 130203308【摘要】大豆异黄酮的生物学功能主要是通过其代谢终产物雌马酚来实现的。
因此宿主能否将大豆素代谢为雌马酚是决定其能否有效地发挥生物功能的关键因素。
大豆素还原酶（DZNR）是决定细菌能否将大豆异黄酮转化为S-雌马酚的关键调控酶。
3. 设计方案和技术路线
1.梭菌C1-6基因组DNA提取2.DZNR基因PCR扩增3.胶回收后连接到克隆载体PMD18-T4.DNA测序获得含PMD18T-DZNR基因的阳性克隆5.质粒DNA提取6.双酶切后连接到表达载体pET-DueT7.DNA测序获得含pET-DueT-DZNR基因的阳性克隆8.Western blot检测DZNP基因的表达情况9.HPLC检测微生物发酵后DHD产量，验证DZNR功能
4. 工作计划
2022.01～2022.02资料搜集：雌马酚相关背景知识的了解与学习基本实验技术学习：细菌基因组DNA抽提、DZNR基因的PCR扩增与克隆2022.03～2022.04DZNR表达载体的构建与体外表达，DZNR基因的功能验证2022.04～2022.05整理数据，撰写论文
5. 难点与创新点
通过全基因组测序分析的方法研究梭菌C1-6转化大豆素生产雌马酚的分子机制，并在体外进行克隆表达和功能验证，为进一步产雌马酚基因簇的确定和其分子机制研究奠定基础，为微生物发酵生产S-雌马酚贮备基因资源。
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